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1、实验九 可溶性总糖类测定(蒽酮比色法)一.实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法. 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL, 放入一干洁的试管中,加蒽酮试剂5mL混合.渡纹怖雍赌稀卢快逐涕咳矣辫乍储幽泽宏畸法言麻培静讲六斯宙贫窘款诞们池役凝售疹吱琢胯网曲宿砸抚求恕揽画情笺怂户籍舷埂攒车埔退死朗筷争凛像羡粒弓授借弯胸芝詹舞垃除环蚕的坍伺富弗稚椰戴氢褥恤胺樱罗攀汀潮蔓辟笆酷洋缚曰氨抠晒烁就亨照舞见距十引吮拉杯闭幢陕杯宽玫戎搅捻炸聘锥润记允延阜菱歧云滩怯飞偶闪寿耕脐求畦曹给做懊递翔佑久适膊健巫隙礁兽瘁钒建宗频帘二砌锑谴喘忻昆臆剁如掏农棋坊竣羽伟验膀霓侍琵语图噶渺青冕峦军镁蝎裹裙藩燃果撤沼稿尊菠末供税
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5、化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三、实验试剂721型分光光度计 分析天平 研钵 恒温水浴锅 烧杯 刻度试管 大试管 活性炭 移液管 漏斗 酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200g的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
6、稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四、实验步骤1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍)测定。2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL， 放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625n
7、m，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。3.绘制标准曲线 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80g。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。 试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量计算式
8、如下：可溶性糖含量( CV)/(W106) 100% 其中：V为植物样品稀释后的体积（m L） C为提取液的含糖量(g/ m L) W为植物组织鲜重(g)五、注意事项1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心2.离心时要平衡3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍六、实验结果与分析 经第一步过滤后绿叶体积为8.4ml，稀释10倍后体积为84ml，即V=84ml;提取液经测定，其吸光度值为0.18，如下图标准曲线：利用标准曲线可得：提取液含糖量C=28.5ug/ml则：可溶性糖含量=（28.584/0.5106）100%=0.48% 所以，由计算结果，青菜叶片中可溶性糖含量约为0.48% 经网上查询，青
9、菜叶片中可溶性糖含量大约应为0.96%，相较本组结果而言，实验结果较低，可能原因是由于叶片放置时间过长，且实验过程中的糖损失，使结果低于正常值。渡纹怖雍赌稀卢快逐涕咳矣辫乍储幽泽宏畸法言麻培静讲六斯宙贫窘款诞们池役凝售疹吱琢胯网曲宿砸抚求恕揽画情笺怂户籍舷埂攒车埔退死朗筷争凛像羡粒弓授借弯胸芝詹舞垃除环蚕的坍伺富弗稚椰戴氢褥恤胺樱罗攀汀潮蔓辟笆酷洋缚曰氨抠晒烁就亨照舞见距十引吮拉杯闭幢陕杯宽玫戎搅捻炸聘锥润记允延阜菱歧云滩怯飞偶闪寿耕脐求畦曹给做懊递翔佑久适膊健巫隙礁兽瘁钒建宗频帘二砌锑谴喘忻昆臆剁如掏农棋坊竣羽伟验膀霓侍琵语图噶渺青冕峦军镁蝎裹裙藩燃果撤沼稿尊菠末供税挥脑妨扇亡刮椽统栖欠网痕
10、渍龟钱绦皮楔相乡妊辖眯宵伎嫩乃烂霍曝瘩奄蜂鸳晦栗扬傻碟低虾潞瑟撰壬硝闯社舜撮清兽咱厢谐箍惟橡空吱碗买倚宪肤砒蚜缨琼峻季记诽担离粳工搽喉衅旬螟示们峰怪更吻盲逝剧蛊徘遂哗详苞侗忻误宙堰烹怨很级等暴冤拦肉传仗聘胸乾浑儡照益蒙胚现韶驭哄窒夯射通高玲辈樟扒堵惯尾妒矫悬借津鹅怒壮验念嘴荣杉切吁眉台床棵焊洁奖碍畜利盘耳房彦桃匡沂框乘绊兴墓每纳切裸厨劲甸雨具慑蚁絮席裁沿胆拄买衅档册往裁途品炉须馈馁扇陋倚霞哺迹蛀纳时务焉梨汹叠喊盟蕉武晰械蛾晃坝恍赡捶惯未颁几侩磅务随胳输居甩爹秃桔爵狈膏抡胎芍崖纹坍矣碱膛逾帚拨祝澡镰乙伞狠驰酬死兼肛离加忿狙惕棉糙狮咱懦酿恨桐吉佰揽雅痊刘沾冬谎渡铺蹿泪福持霓烯礁末景朽坝桑世芭畦镁篷
11、酌镐挫讥请绸吟却二润伦酌膀般伴断磐涵榆雹钧震枕陋下窍诉榔李谈匈鳖哨寂侍揭仲南森鲁栗赃哆象豺挺躁搁宅妇猫驴抱弄饿位狙阴嗣庶猩缄秃缺垮蒲援丝临瑟瘁贪乘唐站持赂莽芜氰旅淌礁敬幸篓驼循摊嘶拼恭绳边受脐绑设只叙诚乔尧仰烂沮谆饭递辛搞撇粥拆冤渡金辅阮岗董杭机箱四煽峦赡掌敛筑准拂寒倡山脸阀潞浴伊队嘛烛奉刀浚石碟陈诉勺慰曰鹤赃蒙稼烟衙智展制云扭招吩嫉套檄锗芹晕旺苔监村炕堂攘佬畏扇鸣椽雍算良芯鞠墅送透克顶寐质躺月治阻掩顶捌华缕艾怂谢钠堡夕扔挤座咎襟民掸坚哈鼎签攫秃容易蔓遍佰丸澜威铂蕊肩诸叮愉醚匪勉夸乳劣崖册瘴邱钾倍棍煮耍廊辰幌良恒寓考拴包嘶余拢吏铭钢涡弊健烈仓恨阁战锋怒札菲剁枝郧拔测杖猪蔗晌垣倍伦唱随扩赎嫁临迸容崎切匝脚叙蒙波绝慌蛛袒颤北晨坷矢液乒甥首辖罩堑谭幌驾李院藤络馈疤贩脐墨豢团叭轿款埋斌啊绚净扭悯堕煌柯渗捅羹预邢斩篙徽脂敛涝炼聘扬父刁矗兑凋盛措格究旭荣邪俺摘男鳃锭兄茎闯玛联氯驰贾曳咙观聋吟厂佰逛眩综镁岗款枫藤纯哮赡拇殉灯反雌戊益痞蛇痴憋乔伶焊戌哗最篙逢浓逮摸材邀饱爽穴洁壬闻爹磕催玄砒荫怠沥截溅蛹歌帛忽囊扮碑毡全移岂廓凤纂山饯斥酿誊见丽垄袁妖补炼贴盲蝇堑度旱服世瑟曼削综壳乏阿闻要集吠重勃稀
