蛋白质特色反应

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1、実験一酸七蛋白質性質実験目的】1. 蛋白質性質0X0知識总身062. T7酸蛋白質O定性、定量方法 XO原理总学恳一、蛋白質0呈色反応蛋白質O呈色反応氐 蛋白質000T7酸特殊卞構造力有色O物質总形成歹6反応疋 一定o条件下“、o力、o試薬总必要6。蛋白質分子夕異6蛋白質中広含H6T7酸残基哲異说I、呈色反応哲異卞6二七夕 fe6o、呈色反応肚夕質o特異的卞反応疋怎卞、o力、o蛋白質物質中怎含 H6官能基（例Nf-CS-NH、-CH2-NH2、-CRH-NH。、-CHOH-CH2NH2E）、蛋白質同様O反 応T6rtfe6o-Hor、私呈色反応o結果力蛋白質力厉6力、力、总判断歹6二玄難S、。

2、（一）反応実験原理】尿素总180度、唯疋加熱歹6罠2分子O尿素1分子OT二放出0、1分子OfT Uyb縮合T6oLX.T力“性条件下疋銅彳才（Cu2+） 錯体总形成U赤紫色总呈歹6。二 O反応反応呼f6。反応O過程0才以下示oH2NH2N”C=OH_Nh2nh2nh2n+180 0C/C = O h2nNHH2NCNHCNH 2蛋白質o分子構造O中怎0多OyK結合夕含HX6o0構造分子O彳 基同様O構造LX6oO,T力“性O条件O下疋銅彳才赤紫色O呈色反応夕 起二6o反応o過程0以下怎示歹。【試薬】1. 蛋白質溶液（io倍蒸留水疋希釈2-3層力一k乙（二疋濾過卵白）2. o.i%y溶液3. 0

3、.01% 了儿斗二A溶液4. 10%NaO H 溶液5. 1%CuSO4 溶液6. 尿素結晶【実験操作】1. 準備少量尿素結晶总取6（yO先程度大吉）。乾燥。亡試験管中広入n疋加熱歹召。尿 素夕融解。、再/硬化加熱歹5 硬化。亡時口玄直包乙加熱总停止T600時、乙匕 形成LXa。冷却。亡後、10%水酸化厶溶液約1 ml总加元疋振蕩歹5。更口 硫酸銅溶液2滴总加元疋振蕩。、色変化总観察T6o注意：a.操作過程中疋試験管先端总人広向b.加熱時間x注意2. Uyb反応観察試験管4本总用意L、下表1通5乙各試薬总加乙変化总観察LX説明Ta。表1.試薬番号1234蛋白質溶液（ml）1.00.01% T儿

4、斗二溶1.00.1%夕、 y少溶液1.010%NaOH(ml)2.02.02.02.0蒸留水（ml）1.01%CuSO.溶液（滴）22224現象（二）二nix反応【実験原理】弱酸性条件下（pH5-7）広指“X、蛋白質酸肚二加熱Tar、青紫 色化合物总生成Ta。r反応txo蛋白質a -Tz酸（彳酸例口匕f口口才黄色o化合物总生成Ta “乙共通feaoTz基总含住他o化合物哲ro反応总起 rTrz夕疋吉a。R-fCOOHnh2OHHOHOOO/OH CHORCHO +NH3 +CO2） 環夕二卜口化多数蛋白質分子環总含酸总持二疋、 黄色反応夕発生T6o二Ty二二卜口化、少量濃硫酸总加元和壬 黄色化

5、合物总発生。反応過程肚以下広示+ HNO3+ H2OHONO2NaOH/QHN.OH試薬】1. 蛋白質溶液：（匕审卜反応七同匕）2. 濃 硝酸3. 20NaOH 溶液4. 0.1%石炭酸溶液（7工丿一儿）実験操作】1. 1%石炭酸溶液約1ml总試験管内広分注濃硝酸5滴总加元、水浴疋加熱0、結果 总観察T6o 20%NaOH溶液总加乙色変化总観察T6o2. 試験管1本広蛋白質溶液1ml七濃硝酸5滴总加元召。沈殿物总確認後、加熱T6（沸騰艺 乜召必要）O沈殿物夕黄色確認0、冷却。亡後20%NaOH溶液总加 元、色変化总観察歹召。結果总記録0、乞現象总説明T6o四）坂口反応【実験原理】了儿力川生0蛋

6、白質溶液広a7b-次亜臭素酸厶总加元召赤色6o 0 力、0、過剰次亜臭素酸厶肚生成色素总酸化退色T6or、尿 素疋過剰次亜臭素酸by厶总分解、生成色素力安定広保亡H退色力遅6o 反応肚蛋白質中二o検出反応二含住蛋白質定性検出 二O 含量总測定二置換 H、/ 誘導体反応歹召。反応O過程0才以下示O” NJNHNHHONHCH2ONH3fH NH 2COOHCH2 fH 一NH 2COOH試薬】1. 蛋白質溶液：审卜反応七同C）2. 次亜臭素酸厶3 10%NaOH 溶液4. 0.2% a卜一儿溶液5. 0.01% 7二溶液【実験操作】1. 試験管広蛋白質溶液lml总分注10%NaOH溶液0.5ml

7、总加元、更広0.2%o-7 卜一儿2滴总混合T6oO後、次亜臭素酸厶溶液2滴、現象总観察T6o2. 試験管0.01%了儿斗二A溶液lml总分注L、上述操作現象总観察歹召二、蛋白質沈殿反応蛋白質肚親水性口口蛋白質口安定6因子总破壊L亡時、求亡肚蛋白質 試薬力結合L溶疗卞塩広卞二亡時、溶液中力沈殿T6o-0現象怎蛋白質沈殿 反応（一）蛋白質塩析作用【実験原理】塩析肚蛋白質溶液広多量中性塩類总加元X溶解度总減少乜、蛋白質沈殿总生于6現象疋厉 6。塩析作用肚2種類要素関係力淌6。第一広多量電解質力加電解質力親水口 口彳K粒子周。水分子总奪“取oXL5。第二広顆粒表面電荷总中和T6o-Ho結果、 口口彳

8、K粒子力集求二X沈殿T6o蛋白質塩析作用肚可逆的fe6oT、塩析蛋白質总沈殿龙乜亡際広、蛋白質肚変 性、沈殿L亡蛋白質总透析歹6力、水疋希釈L再/溶解T6rt6。必要T6中 性塩濃度氐 蛋白質種類pH 関係力淌6分子量大吉蛋白質（夕、口yy）小乂、蛋白 質（了儿X。塩析 LTo【試薬】1. 蛋白質溶液：（匕审卜反応七同匕）2. 硫酸二厶（固体）3. 10%NaOH 溶液4. 1%CuSO4 溶液【実験操作】1. 試験管-蛋白質溶液約2ml总分注L、硫酸二厶粉末总加元6。硫酸二厶 肚飽和L溶解L6加元6。二時溶液色肚乳白色fe6O後、濾紙总使二X濾過T 6o2. 濾液总取oXUyb反応总LX、濾

9、液中疋蛋白質存在T6力、力、总確認T6o3. 蛋白質沈殿总1ml蒸留水P容解L尢後-Uyb反応总L、塩析L亡蛋白質夕再水- 溶解LX変性总引吉起rLXr証明T6o二）重金属類沈殿反応【実験原理】溶液pH力蛋白質等電点以上時、重金属塩類（例Pb2+、Cu2+、Hg2+Z Ag+卞号肚蛋 白質結合。、水不溶性塩類沈殿重金属塩類肚蛋白質总完全広沈殿、重金属塩類肚液体中 蛋白質总取。除用力心、力s重金属塩（Cuso4PbAc卞E）過剰量总加沈殿物总再/溶解注意【試薬】1. 蛋白質溶液：（匕审卜反応七同匕）2. 5CusO4 溶液3. 3AgNO3 溶液【実験操作】1. 試験管2本広、蛋白質溶液lml于

10、。分注T6o2. 2-3滴5%CuSO4溶液、3%AgNO3溶液总加乙形成L亡沈殿物总観察T6o3. 硫酸銅生成H沈殿物总少量沈殿物总残L疋別試験管広移九 試験管広残二 亡少量沈殿物広5%CuSO4溶液加N匚 沈殿物溶解总観察T6o（三）了儿力口彳試薬沈殿反応【実験原理】了儿力口彳M玄植物中窒素总含住著LX生理作用总持F儿力“性物質fe6o 一般h儿 力口沈殿力口作用l有色反応生成物总生ca 力口彳k試薬称a。例N壬夕 二 酸、匕酸卞Efea。蛋白質溶液o pH値 力等電点X。低“時、蛋白質肚陽彳才儿力口彳k試薬o陰彳才結合l中性塩o沈殿 总生ca。求。、溶液中o蛋白質怎含求Ha力儿术牛sv基

11、広作用l沈殿Tao、特広卜夕 口儿酢酸总用a最t鋭敏広作用Ta、蛋白質总沈殿arx用xHao【試薬】1. 蛋白質溶液：（匕审卜反応七同C）2. 10%卜9夕口儿酢酸溶液3. 20%夕債二A酸溶液【実験操作】1. 試験管広蛋白質溶液lml总分注L、数滴卜9夕口儿酢酸溶液总加N現象总観察Ta。2. 試験管広蛋白質溶液1ml总分注L、数滴夕 二酸溶液总加N現象总観察Tao四）加熱沈殿蛋白質【実験原理】大多数o蛋白質怎加熱Tar、安定性总喪失l立体構造力破壊Ha、変性1H凝固Tao 温度力上昇Tar従二疋蛋白質o熱変性怎加速L、短時間疋加熱L疋凝固总引吉起rTr 吉a。加熱Ta時、溶液中o塩o存在壬p

12、H力蛋白質o凝固怎対l疋大吉卞影響总与NaoTs 等電点状態o蛋白質夕加熱Ha最t迅速疋完全広凝固Ta強酸、強t儿力9o溶液中无蛋1-6白質分子处電荷总持d加熱LXt凝固Lo S心、溶液中広中性塩力存在 蛋白質肚加熱。凝固T6o【試薬】1. 蛋白質溶液：(匕审卜反応七同D2. 1酢酸溶液3. 10酢酸溶液4. 10NaOH 溶液5. 飽和塩化厶溶液【実験操作】試験管4本总用意下表2広従二疋各種試薬总加元5混合試験管总観察歹 。続疋、沸騰lx6水浴中io分加熱試験管o沈殿物o状態总比 較l観察Taro 1番皿容液夕蛋白質o等電点七接近、最哲不安定最哲早 沈殿Ta。乞o次怎第4番力沈殿T5o2番3

13、番肚強“酸性力川生 n、蛋白質 肚電荷总持、加熱Lxt沈殿Lorn確認l亡後、2番広飽和Lxa塩化于卜 厶溶液広加元az、直弐広白色o沈殿物夕現na。表2.試薬番号1234蛋白質溶液 (ml)1%酢酸，滴 10% 酢酸，滴10% NaOH,滴 蒸留水，滴1.0 1.0 1.0 1.011010101111現象实验一 氨基酸及蛋白质的性质实验目的】1. 加深理解所学有关的蛋白质性质的理论知识2. 掌握氨基酸和蛋白质常用的定性、定量分析的方法及原理一、蛋白质呈色反应蛋白质的呈色反应是指蛋白质所含的某些氨基酸及其特殊结构，在一定条件下可与某些试剂发生了 生成有色的物质的反应。不同蛋白质分子所含的氨基酸残基也是不完全相同，因此所发生的