《活性污泥中微生物菌种的分离筛选及固定化方法研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《活性污泥中微生物菌种的分离筛选及固定化方法研究（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、班级：给水排水工程1002班 姓名：白帆 学号：10330204活性污泥中微生物菌种的分离筛选及固定化方法研究微生物通常是肉眼看不到的微小生命体，而且无处不在。人类利用微生物已经有几千年的历史，利用微生物处理人类的各种污染物也有100多年的历史。分离纯化，是研究和利用微生物的第一步，是微生物工作中最重要的环节之一。从混杂的细胞群体中将不同的细胞区分开来达到分离纯化，主要是根据不同的细胞所具有的各种各样的特性来实现的，包括细胞的物理特性如密度、体积、电荷等，以及细胞的生物学特性如特异性表面标志和功能、对某种营养元素或抗生素的敏感性J。不同种类的微生物，其特性和生理功能不同，因此微生物的分离纯化也
2、有差异。常采用的方法如下：1、 固体培养基分离纯培养：稀释倒平板法l涂布平板法平板划线法L稀释摇管法(用于厌氧菌的分离纯化)2、 液体培养基分离纯培养：稀释法3、 单细胞(单孢子)分离法4、 选择培养基分离5、 二元培养物微生物固定化技术是20世纪60年代由生物化工中的固定化酶技术发展起来的生物技术，所谓固定化微生物技术，是利用化学或物理手段将游离的微生物和酶固定在载体上使其高度密集并保持其生物活性功能，在适宜的条件下还可以增值以满足应用之需的生物技术。与其它应用游离微生物的过程相比，固定化微生物技术可以使微生物在某一固定区域具有较高的度，减轻或消除微生物的流失，提高反应速度，同时便于培养优势
3、微生物种群，提高处理过程的稳定性，减少或消除副反应的发生，便于控制处理过程。目前，固定化微生物技术己成为国内外生物科学、环境科学及其相关学科研究的重点。20世纪80年代起，中国在废水生物处理方面进行固定化酶及固化微生物的生物处理废水研究，从好氧活性污泥和厌氧污泥中分离筛选对某一种废水成分分解能力强的微生物，将其固定化用于废水处理试验。一、试剂与仪器菌种(I)试剂：氢氧化钠：AR分析纯；蛋白胨：A.R；琼脂：C.P；牛肉膏；100 gL NaOH：在电子天平上准确称取固体氢氧化纳10 g，用去离子水定容至100 mL；100 gL HCL：取10 mL盐酸，用去离子水定容至100 mL；(2)仪
4、器：BSBT系列电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；电热恒温鼓风干燥，DGG-9140B，海森信实验仪器有限公司；不锈钢立式电热蒸汽压力消毒器，LDZX-40型；上海申安医疗器械厂恒温振荡器，CHA-S，常州国华电子有限公司；可见分光光度计，VIS-7220，北京瑞利分析仪器公司；生化培养箱，LRH-150B，广东省医疗器械厂；(3)移液管：1 ml，2 ml，10 ml若干。锥形瓶若干，烧杯2个(500 ml，1 000 ml)，试管若干，酒精灯1个，电热炉1个。二、实验过程2.1培养基制备固体培养基：胰化蛋白胨10 g、氯化钠5 g、酵母提取物3 g、琼脂18 g、水1000 mL、p
5、H 7.07.2。以上培养基都在灭菌箱中以1.10 MPa下高温灭菌。2.2菌种分离筛选2.2.1稀释平板分离法(1)取样将从南昌市朝阳污水处理厂的活性污泥制成悬液。(2)稀释水样将1瓶90 ml和3管9 ml的无菌水排列好，按l0-1、10-2、10-3及10-4依次编号。在无菌操作条件下，用10ml的无菌移液管吸取10ml水样置于第一瓶90ml无菌水中，将移液管吹洗三次，用手摇10 min将颗粒状样品打散。即为10-1浓度的菌液。用1 ml无菌移液管吸取1 ml10-1浓度的菌液于一管9 ml无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。同样的方法，依次稀释到10-4。(3)平板的
6、制作：取1O套无菌培养皿编号，10-2、10-3、10-4三个，另一个为空气对照。取一支1 ml无菌移液管从浓度小的10-4菌液开始，以10-4、10-3、10-2为序分别吸取0.5ml菌液于相应编号的培养皿内，冷却后即成平板，倒置于30培养24 h48 h，然后观察结果。2.2.2涂布分离法点燃酒精灯，取5个已灭菌的干净培养皿，在酒精灯火焰旁分别依次向其中倒入培养基，培养基的量以刚刚盖住培养皿底1mm处为宜，让培养皿自然冷却，培养基就会凝固成光滑的平面。用无菌吸管吸取少量南昌市朝阳污水处理厂的活性污泥于无菌小量杯中，用大量无菌蒸馏水进行稀释，摇匀静置约20 min；然后用无菌小吸管吸取少量上
7、面制备的活性污泥稀释液，在酒精灯火焰旁，滴一滴于平板上，将平板倒置放在水平桌面上，在室温下培养2d3d，然后观察结果。三、实验结果与讨论3.1菌落形态特征观察由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力的不同生理特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况也不一样。经过驯化与分离，在培养皿上可以观察到不同的菌落特征。3.2微生物分离筛选的影响因素3.2.1培养基对分离筛选产生的影响一般来说，营养越丰富的培养基越有利于微生物的培养，但是污泥中的各类微生物之间对营养要求差别较大。不同的微生物器生长有其自身的特点，所以都有适合各自生长繁殖的培养基。碳源、氮源、碳氮比、磷酸
8、盐、营养因子、其他物质这些培养基的基本组成都会对微生物的分离筛选起重要的作用，其中人员一项的改变都会对分离出来的菌种起决定性作用，不同组成比例的培养基分离筛选的菌种可能会完全不一样。3.2.2 pH值对微生物分离筛选的影响对特定的微生物来说，存在最适合自己的pH和一定的pH值范围，pH值过高或过低均不利于微生物的培养。所以要在同一培养基中尽可能多的分离筛选出更多的菌种出来，就要将培养基稳定在一个pH值范围内。3.2.3温度对微生物的分离筛选的影响温度对微生物培养是个很重要的影响因素，不同的微生物的生长稳定是不尽相同的，有些时候会相差很大。但是一般的微生物的最适宜温度在2535之间。高温可能使大
9、部分微生物失去活性，温度过低则会使培养基中的微生物大部分处于休眠状态。3.4讨论本实验为微生物提供了最适合的生长条件(培养基、温度、PH值)，对分离筛选菌落非常的有利。通过稀释平板分离法和涂布分离法比较容易的分离筛选出六种微生物菌种。稀释平板分离法得到的平板上菌落分明，但操作过程较麻烦。在进行微生物分离纯化时，该方法需要样品与热的培养基混合，因此对热敏感微生物的影响明显。该方法操作过程中，样品中的微生物有的分布于平板表面，有的则裹在培养基中，后者则会影响严格好氧微生物的生长；而且，对于同一种微生物，平板表面的菌落形态与培养基内的菌落形态会存在着明显的差别，影响菌落形态的判别。在进行微生物计数时，该方法细胞分散均匀，计数较准确。稀释涂布平板方法操作相对简单，它克服了倾注平板方法对热敏感微生物、严格好氧微生物和培养基内部菌落带来的不利影响，是实验室中经常使用的常规分离方法。其存在的问题是有时会由于菌液太多或者涂布不均匀而使细胞分散不充分，影响计数结果和分离纯化效果。
