质粒浓度测定

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1、用分光光度计测定质粒 DNA 的浓度一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为 260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。对标准样 品来说，浓度为1p g / ml时，DNA钠盐的OD260=0.02当OD260=1时，dsDNA浓度约为50p g / ml ssDNA 浓度约为 37|J g / ml RNA浓度约为40p g / ml 寡核苷酸浓度约为30p g / ml当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定

2、。一 般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。 经验值：纯DNA： 0D260/0D2801.8（1.9,表明有RNA污染；VI。6,表明有蛋白质、酚等污染） 纯RNA： 1.7 VOD260/OD280V2.0 （V1.7时表明有蛋白质或酚污染；2.0时表明可能有 异硫氰酸残存） 若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量。三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水， TE 缓冲液3、器皿石英比色皿；UV-240紫外分光光度计四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上 盖板。3、设定狭缝后校零。4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5p丨或RNA4p丨用TE缓冲液稀释至1000p I） 后, 记录编号和稀释度。5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。6、设定紫外光波长，分别测定 230nm、 260nm、 280nm 波长时的 OD 值。7、计算待测样品的浓度与纯度。DNA样品的浓度（|J g / p l） :OD260X稀释倍数X50/1000RNA样品的浓度（p g / p l）： OD260X稀释倍数X40/1000