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1、水饱和酚和 Tris 饱和酚的区别水饱和酚和 Tris 饱和酚( Phenoi Water/Tris-phenol )的区别:一、水饱和酚又叫水平衡酚。水饱和酚的 PH 小于 7,一般是 PH 为 5.0 左右,通常与异硫氢酸胍一 起使用,用于细胞 RNA 的提取,在 酸性环境中, DNA 在酚相, RNA 在水相。 两者就分开了。二、 Tris 饱和酚一般 PH 大于7.8,用于 DNA 的提取。其中,酚是强的蛋白变性剂,可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出 。 而 Tris 的主要作用是防治止酚类氧化 ,若酚类氧化, 则会形成醌 (两个苯环) ,醌含有强自由基,会破坏核酸结构。 同时,由于
2、PH 值大于 7,在 碱性环境中 DNA 处于水相, RNA 处于有机相。 从而分离上清,即可得到 DNA 。Tris 饱和酚的配置:1 、冰箱取出重蒸酚,室温放置 68 度水浴溶化,切勿立即放入 68 度的水浴中,以防玻璃炸裂2、加8 羟基喹啉至0.1 %和B巯基乙醇至0.2 %,(原液14. 4MOL/ML ),混匀,溶液呈现黄色, 倒入分液漏斗中(也可在烧杯中进行)3、加入等溶剂的 1MOL/ML 的 Tris(PH8.0), 反复混匀后,静至分层;放出下层黄色酚液,弃上层4 、加固体 Tris 约 1g/100ml 酚,摇匀,去水相5、力口 0.1MOL/MLTris(PH8.0) 平衡数次,至 PH 为 8.06、加 0.1MOL/MLTris(PH8.0) 于棕色瓶中 4度保存7、如黄色消失或呈粉红色(说明酚已经被氧化),则不能使用