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1、色谱柱的使用和维护注意事项色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低 柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注 意下列问题，以维护色谱柱。1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度 的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充 状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调 节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如 前所述）。2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应 直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可 以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅 速降低柱效。4、选择使用适宜的
2、流动相（尤其是pH），以避免固定相 被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱， 分析柱是键 合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先 被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。5、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。 在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶 剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。6、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要 拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静 置或更长时间。7、色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧 结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一 种可能是大分子进入柱内，使柱头被污
3、染；如果柱效降低或 色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。在后两种 情况发生时，小心拧开柱接头，用洁净小钢将柱头填料取出 1-2mm高度（注意把被污染填料取净）再把柱内填料整平。然 后用适当溶剂湿润的固定相（与柱内相同）填满色谱柱，压平， 再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复 到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一 根与分析柱相同固定相的短柱（5-30mm），可以起到保护、延 长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得 的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为 基质的填料，只能在pH2-9范围内使用。柱子使用一段时间 后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些 有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。8、新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷， 使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后， 最好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗 至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用 无盐流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子 如不经常使用，应每隔4-5天开机冲洗15分钟。
