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1、土壤中蛔虫卵检测一、背景卫生部于2006年在全国设立了 22个土源性线虫病监测点开展 监测工作，监测方案中要求对每个监测点进行人群土源性线虫病监 测的同时，还需监测土壤中人蛔虫卵的污染情况。20062010年的 监测数据显示，土源性线虫病监测点土壤中人蛔虫卵检出率分别为 37.1%, 29.5%, 25.9%, 31.3%和 24.4%,统计分析表明，土壤人蛔虫 卵检出率与人群蛔虫感染率呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况 是评价环境卫生状况的一项重要指标。二、原理先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与土壤颗粒，再 加入比重较大的液体使得比重较轻的蛔虫卵漂浮在溶液表面,收集后 镜检计数。
2、三、采样要求1分别从表面及23厘米深处采取土样，因为虫卵存活时间与 土层深度有关；2在用人粪施肥的农场和菜地可分别在陇上和犁沟中取土样，同 时还应取20厘米深处的土样，以确定虫卵附着在根块植物上的可能；3为了测定不同局部气候条件下虫卵存活率，要从有日光照射和 荫蔽区采取土样；4厕所、庭院、厨房取表层土；5每份土样约100g。四、步骤1 土样处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒； 然后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛,收集过筛后的土样。2分离：取50ml大离心管，放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化 钠溶液至40或45ml刻度线。用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡 15分钟，
3、可反复34次，待充分混合后，以2000rpm，离心4min。3漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混 匀，2000rpm离心4min,再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm x 18mm盖玻片。4计数：静置15min后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片上 镜检，同时再覆上第二张盖玻片，如此反复，共计麴4张盖玻片。五、影响土壤蛔虫检出率的因素1漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因素， 用比重大的溶液作为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、 氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液蛔虫卵的 检出率最高。2土壤性质：土壤性质决定了虫卵与土壤颗粒粘合
4、的程度，蛔虫卵 检出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。3离心的时间与次数：延长离心时间、提高离心速度或增加离心次 数均可以提高蛔虫卵与土壤颗粒的分离效果进而提高检出率。六、蛔虫卵形态受精蛔虫卵呈短椭圆形或圆形，卵壳厚，双线层,外包一层乳头 状突起的蛋白膜，呈棕黄色。未受精蛔虫卵与受精卵相比显得狭长, 多为长椭圆形，卵内充满大小不等油滴状卵黄颗粒。七、蛔虫卵活力测定受精与未受精蛔虫卵1直接镜检法活的受精蛔虫卵：内含一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间， 有半月形的空隙，卵内的卵黄颗粒清晰而致密；若卵内含幼虫，虫体 的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时， 注视或轻压，可见有
5、轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。死受精蛔虫卵（变性卵）：卵细胞移向一端，或向不定部位呈球状收缩， 致使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙；卵内脂肪变性，形成空 泡；卵细胞颗粒减少或消失；细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色；卵壳的 一侧或两侧向内凹陷或破裂；只有蛋白质壳，而缺内容物。若卵内含 幼虫，虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体感， 久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动；强压时，虽能挤出幼虫， 但也不改变其原来的卷曲状态。2蛔虫卵培养法(1) 在直径1012cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm的脱脂棉；(2) 在脱脂棉上铺一张直径与平皿等大的普通滤纸；(3) 在滤纸上，再放
6、一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小滤纸片 上；加入2%福尔马林液，以湿透滤纸和脱脂棉；(5) 放入在2830C温箱中培养1个月观察虫卵死活。(6) 培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片上，滴 加50%甘油溶液，使其透明后，根据形态，鉴定卵的死活。凡含有 幼虫的，都认为是活卵，其他阶段的或单细胞的，都判为是死卵。3美蓝、伊红、硼砂染色法(1) 美蓝、伊红、硼砂染液(简称M.E.B染液)的配制将0.2g美蓝加入100ml蒸馏水中煮沸10分钟，加入硼砂0.5g,再 煮沸10分钟，冷却后加入伊红0.1g,待完全溶解后过滤备用，pH值 为1011,在室温中可放置1.5年。(2) 脱蛋白膜:将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用1分钟，并 经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白质膜。(3) 染色镜检:吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加M.E.B染液一 滴，覆盖玻片，静置35分钟后镜检。或者，吸取虫卵沉淀物1滴 放入小试管内，加入染色液染30分钟，再用蒸馏水洗23次，吸取 沉淀物镜检。鉴别死活:活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。
