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1、母猪繁殖障碍疾病的血清学调查报告母猪繁殖障碍疾病的血清学调查报告摘要 : 随着猪场规模化、集约化程度的不断提高, 猪病的种类也在不断增加,特别是近年来的母猪繁殖障碍性疾病严重制约生猪产业的发展。2004 年我们引进了带有外种血缘的外种猪洋二元母猪，进行了优良品种推广，结果 80%的猪场母猪普遍出现第一胎发生流产、早产、死胎，新生仔猪和断奶仔猪发病率和死亡率增高，高达 20%，而母猪一般无临庆症状，对这情况我们凝似是母猪繁殖障碍性疾病，故进行了血清调查。共采血抽样 237 份，分离血清 212 份，并对分得的 212 份血清全部进行蓝耳病（ PRRS）检测，其中阳性 80 份，阳性率37.7%；
2、对其中的 160 份血清进行了伪狂犬（ PR）检测， 160 份进行了猪瘟（ HC）检测， 160 份血清进行了细小病毒（ PPV）检测。结果表明 : 一十三个猪场均有以上母猪繁殖障碍病存在。由此可见：母猪繁殖障碍病在我县外种猪场已普遍存在。关键词：母猪 ; 繁殖与呼吸综合征 ; 调查 ; 血清学 ; 检测As hog farms have increased in both size and efficiency,so have hog disease types,In rencent yesrs,the problem has been especially serious among b
3、reeding sows,where disease has increased inferticity and negatively affected the development of the hog breeding industry In 2004,blood was collected from 237 sous From these,212 samples of serum were successfully produced and tested for bluc Ear pisease (PRRS).The positive test rate Was 37.7 percen
4、t (80 positivesamples)Also tests for three types of disease porcine pseuudo rabies(PR),swine Fever(HC),and wicroscopic Viral infection (PPV)were performed,each test on 160 of the samples.Sow;porcine reproductive and respiratory母猪繁殖障碍疾病是近年来危害母猪的一种主要的疫病，现已被广范受到人们的重视，它以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔、畸形胎和母猪不育、配不上
5、种为主要特征的一类疾病。此病主要包括猪瘟(HC)、猪伪狂犬病 (PR)、猪细小病毒病 (PPV)、繁殖障碍与呼吸综合征 (PRRS)和猪乙型脑炎 (JE) 等几种病。 2004 年我们对存在有明显繁殖障碍病的 13 个猪场的 237 母猪头进行采血，分离血清 212 份，并对分得的 212 份血清全部进行了检测，对其中的160 份血清进行了猪伪狂犬、猪细小病毒检测，并根据检测结果对母猪繁殖障碍原因进行了分析总结，现将详细情况分述如下。1 材料和方法1.1材料被检血清被检血清来 13 个母猪场，耳静脉采血，3600 转/min 分离血清，待检。主要诊断试剂蓝耳病 ELISA 试剂盒：由美国IDE
6、XX公司提供；猪瘟诊断抗原及阴、阳性血清：由兰州兽医研究所提供；猪伪狂犬 LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供；猪细小病毒 LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供。1.2方法母猪繁殖于呼吸综合症方法：间接ELISAA 采样：常规采血，分离血清，无腐败、溶血、凝块和沉淀。B 准备：A 试验前将所有试剂从冰箱中取出，置室温下达到室温，并轻轻摇匀，用后立即放回冰箱。B 将达到室温并完全溶解的洗液深缩用灭菌水或去离子水稀释10 倍。C 将待检血清用稀释液进行 40 倍稀释；注意匆将阳性 / 阴性对照血清稀释。C 取出抗原孢被的 96 孔板（该板的 1、 3、 5、 7、9、11 列孔包被的 PRRS
7、抗原， 2、4、6、8、10、12 列孔包被的正常 MARC 145 细胞抗原），在工作表上标记好样品的位置。D 取 100UL阴性血清分别加入 C1、C2、 D1、D2孔中。E 取 100UL阳性血清分别加入 A1、A2、 B1、B2 孔中。F 取 100UL稀释的待检血清分别加入相邻的 PRRS抗原孔和 MARC 145 细胞抗原孔（ NHC）中。H在室温下孵育 30mim。L 将反应板孔里的液体倒入废液缸，并在吸水纸上扣干。J 每孔加入 300UL洗涤液（含 Tween20 的 PBS），置室温约 3mim，弃去孔中液体，重复 35 次，最后一次在吸水纸水轻轻扣干。K 每孔加入 100U
8、L酶标抗体复合物，在室温下孵育 30mim。并利用此空隙，取等量底物浓缩液和底物稀释液混匀（如5.5ml ： 5.5ml ）。L 重复 I 、J 操作。M每孔加入 100UL稀释好底物溶液，在室温下孵育15mim。N每孔加入 100终止液O用酶联免疫检测仪于650NM波长下测定各孔的吸光度值。Q 结果判定：a pc：PRRSNC：PRRS0.150 ，试验方成立。b S/P 0.4 ，样品血清 PRRS抗体阳性； S/P 0.4 ，样品血清 PRRS抗体阴性。猪瘟检测方法：正向血凝试验a 取一洁净玻片，以蜡笔划成 34c 小格，如下图血清号第1格第2格第3格第4格阳性血清对照 0.08ml 0
9、.04ml 0.02ml 0.01ml阴性血清对照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml血清样品 1 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml血清样品 2 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01mlb试验前，先将待检血清、标准血清和抗原置于室温，使其达到20。B 将待检血清、标准血清按上表中的量，垂直接触玻片分别加到各方格内。C 摇匀抗原，每一血清格内分别垂直加入 0.03ml 抗原。D自 0.01ml 血清格开始，用牙签将抗原与血清完全混合，摊开直径2CM左右，依次至 0.02ml 、0.04ml 、 0.08m 血清格，一个血清样使用一牙签。E轻
10、轻摇动玻片后，室温静置58min。春冬季节室温较低时，可置于30左右的温箱中。F 记录结果出现大凝集片或小粒状物，液体完全透明，即100%凝集。有明显凝集片和粒，液体几乎完全透明，即75%凝集。有可见凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集。猪伪狂犬检测方法：乳胶凝集试验操作步骤取待检样品、阳性 / 阴性对照血清和稀释液各一滴，分别置于玻片上，各加一滴乳胶抗原，用牙签或火柴棍搅拌，并轻轻摇动12min 后，于 3 5min 内观察结果。也可将血清作倍比连续稀释，每个稀释度加乳胶抗原进行定量分析。C判定结果：A 所有对照成立，即阳性血清呈“”，阴性血清和稀释液呈“”，试验方有效。样品出现“ +”
11、以上者为阳性。猪细小病毒检测方法：乳胶凝集试验。2 调查内容2.1流行病学调查：通过查阅记录，调查种源、胎次，发病的季节性。2.2饲养管理调查：主要包括饲料质量，营养成份，有无霉变；有无环境、机械等不良因素引起的，防疫、免疫、消毒是否落实到位。2.3临床病例剖解：包括对繁殖母猪的临床检查及对发病母猪所产部分弱仔及新生病仔猪的病理剖检观察。2.4血清学检测：对采得的212 份血清样品进行蓝耳病抗体检测和部分血清的伪狂犬、猪瘟、猪细小病毒检测。2 检测结果及讨论3.1发生繁殖障碍的母猪有长白、约克及长白约克，发病母猪没有明显的品系差别；发病的胎次主要集中在第一胎，在第一胎过后，很多母猪不再表现明显
12、的繁殖障碍病 ( 说明在第一胎过后产生了抗体对该病有一定的免疫保护力 ) ；发病没有季节性，一年四季均可发病；发病猪主要表现产死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔猪发病死亡。3.2猪场的饲料基本上都统一饲喂母猪专用料，不存在霉变和质量问题，也无环境或机械因素引起的流产和死胎。在采血检查时除两家猪场拿不出严格的免疫记录档案外，其他猪场都按免疫程序进行了免疫，并做到定期消毒。3.3剖检弱仔和新生病仔猪，大体表现一致，体表贫血苍白，皮下脂肪多黄染，肾呈土黄色，在表面有小出血点，有的淋巴结水肿出血呈大理石样状，心包积液，小叶性肺炎，肝褐黄色。3.4血清学检测结果：母猪繁殖障碍疾病血清学检测统计表猪场 蓝耳病
13、伪狂犬细小病毒繁殖障碍病史样品数阳性数阳性率 样品数阳性数 阳性率样品数 阳性数阳性率1场 35 10 28.6%14 857.1%14 642.9% 11头流产、死胎、木乃伊胎2场 32 7 21.9%17 1058.8%17 847.1%记载不详3场 14 5 35.7%14 1071.4%14 964.3% 14头流产、死胎、木乃伊4场 20 14 70.0%20 14 70.0% 20 16 80.0% 4头发流产5场 26 13 50.0%13 11 84.6% 13 9 69.2%记载不详6场13215.4%13 6 46.2% 13 7 53.8% 9头流产、死胎、弱仔、木乃伊、
14、7场9111.1%9666.7%9555.6% 1配不上种、 1 头产死胎、 7 头流产、弱仔8场1100.0% 11 8 72.7% 11 8 72.7% 11头流产、死胎、木乃伊、弱仔9场12758.3%12 6 50.0% 12 7 58.3% 12头流产、死胎、弱仔、木乃伊10场 7 2 28.6% 7 6 85.7%7 4 57.1%7死胎、木乃伊11场 7 3 42.9% 4 2 50.0%4 3 75.0%7头发生过流产、死胎、木乃伊12场 24 16 66.7%24 20 83.3% 24 17 70.8% 24头发生过流产、死胎、弱仔13场200.0%22100.0%2 1 50.0%2头后备发病猪合计 212 80 37.7% 160 109 68.1% 160 100 62.5% 110头繁殖障碍4 小结与分析4.1通过流行
