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1、大 理 学 院 成 人 高 等 教 育毕 业 论 文办学单位大理学院公共卫生学院专 业医学检验层 次大学专科论文题目三种肺炎支原体检测法的临床应用分析作 者杨志萍指导老师文玉梅学 号11GW0417084职 称主治医师工作单位迪庆藏族自治州人民医院工作单位迪庆藏族自治州人民医院 2013年10月15日三种肺炎支原体检测法的临床应用分析作者：杨志萍（2011级大理学院医学检验专业函授班，学号：11GW0417084）摘 要:目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法 采用3MP检测
2、法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果 回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.52.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.23.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.14.5）天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 关键词:肺炎支原体，快速培养
3、法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对研究The Cinical Application Of Three Kinds Of Mycoplasma Pneumoniae Test AnalysisAuthor: Yang Zhiping（Grade 2011 medical test specialty HanShouBan Dali College, student ID: 11 gw0417084）Abstract：Objective to evaluate the mycoplasma pneumoniae (MP) swabs rapid liquid culture method,
4、pharyngeal swab method of polymerase chain reaction (PCR) and serum MP methods such as passive agglutination method (MP - Ab) MP infection in children in the process of diagnosis and treatment sensitivity methods using 3 MP test clinical examination in 362 cases of respiratory tract (nonbacterial) i
5、nfection of childrens throat swab and serum specimens matching study, each child take swabs for rapid culture and PCR, take do MP - Ab serum detection at the same time, the test results of three methods and cases of clinical diagnosis and treatment were retrospectively analyzed. The results of revie
6、w 152 cases of children clinical diagnosis of MP infection. 78 MP fast culture method detected positive, positive rate was 51.3%, the course was (4.5 + 2.6) days; PCR method to detect the positive 103 cases, the positive rate was 67.8%, the course was (6.2 + 3.5) days; MP - Ab method to detect the p
7、ositive 127 cases, the positive rate of 83.5%, the course of the disease (8.1 + 4.5) days. Conclusion the sensitivity of the three kinds of MP test has correlation with course of the disease, clinicians should choose detection method according to the course of children, in order to improve the posit
8、ive detection rate and sensitivity.Key words: mycoplasma pneumoniae, rapid culture method, pharyngeal swab polymerase chain reaction, serum antibody, matching study前 言肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）是婴幼儿、青少年急道感染的主要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中约3%10%可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。
9、笔者采用3种MP检测法对362例临床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做出诊治。二00五年十月，根据迪庆州人民政府关于印发城镇卫生体制改革实施意见的通知（迪政发200261号）及香格里拉城州州县人民医院卫生资源整合实施方案（迪政发200523号），原州人民医院及香格里拉县人民医院，正式合并，合并后组建成立了“迪庆香格里拉人民医院”。经过两年多的努力，医院取得了一定的成绩，目前，医院共设七个职能科室，17个临床科室，全院在职人员256人，专业技术人员214人。正高1人，副高职称21人，中初级医技人员1
10、80人。在州委、政府的关心支持下，新建门诊医技大楼将于2008年正式投入使用。迪庆州香格里拉人民医院门诊大楼第一章 文献综述1.1肺炎支原体的定义小儿肺炎支原体肺炎多见于5-15岁儿童，婴幼儿患病常表现为毛细支气管炎。多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳，常有咽痛，头痛等症状。X线改变明显，多为单侧病变，也可见双侧病变，以下叶为多见，有时病灶呈游走性，少数呈大叶性阴影；病程2-3周不等，X线阴影完全消失比症状消退更延长2-3周之久，偶有延长至6周者。1.2 肺炎支原体的发病机制肺炎支原体肺炎（Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP
11、）的发病机制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫学发病机制等学说，其中免疫调节异常在MPP的发生发展中可能起重要作用。1.3肺炎支原体的临床表现1. 多数为亚急性起病，发热无定型，或体温正常，咳嗽较重，初期为刺激性干咳，常有咽痛，头痛等症状。2. 可出现多系统多器官的损害，皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹；偶见非特异性肌痛和游走性关节痛；也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及溶血性贫血等。3. 全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显，偶有呼吸音稍低及少许干湿罗音者1.4 肺炎支原体的临床诊断病原学诊断，肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法，在肺炎支原体肺炎感
12、染的早期可提供重要的依据，可做为临床诊断MP感染的优先试验8；气管肺泡灌洗液MP-DNA测定不仅能诊断MP感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改善及体征恢复，且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液MP-DNA，痰液MP-DNA及血清MP抗体检测阳性率没有差异。CRP的检测是肺炎病原体的辅助诊断方法，一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(PCR)技术检测MP具有可靠、特异性高的特点，逐渐成为早期特异诊断的有力武器。1.5 肺炎支原体的实验室检查急性期MPP患儿血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明显升高，IgA明显降低；而恢复期hs-CR、IgG仍然较高，而IgM和I
13、gA均没有明显变化，补体C3、C4在恢复期内也没有明显变化，因此血清C-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监测对诊断急性期或恢复期MPP有重要意义。MP-IgM和冷凝集试验同时检测可提高小儿支原体肺炎实验诊断的准确率；支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常占80%，中性粒细胞增高占61%；65.6%患儿C-反应蛋白增高；53.6%患儿血沉增快；58.4%患儿心肌酶谱增高；24.0%患儿肝酶增高；16.8%患儿尿酸增高。1.6流行病学特点及进展MP肺炎发生率约为22.3%，912岁感染率最低,36岁最高,1012月是发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病率高,肺炎支原
14、体只要通过呼吸道进行传播，尤其发病率较高的地区，局部区域每隔3-5年可发生一次肺炎支原体感染，每2-6年可发生一次大范围的肺炎支原体感染，每次感染的时间都持续较长，有的感染可持续一年左右，因此，有关部门一定要采取相应的预防措施，切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生和流行具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。第二章 材料和方法2.1 样本 收集迪庆藏族自治州人民医院医院检验科2013年1月1日8月6日在儿科就诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象，其中男175例，女187例；年龄为2个月12岁，病程为190天。2.2 方法 具体方法有：（1）用MP
15、快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。（2）通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数，并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。2.3 临床诊断MP感染的诊断标准 按文献1、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断即患儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。2.4 MP快速培养法 支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽
16、拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 培养；培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180 bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP质粒，阴性对照为无菌生理盐水），由专人进行操作，质量控制。MP-Ab法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab检测试剂SERODIA-MYCO凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3 ml，采用明胶颗粒被
