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1、小鼠a羟基丁酸脱氢酶(aHBDH)ELISA试剂盒使用说明书本e乔羽圭將本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中 a羟基丁酸脱氢酶(aHBDH)的含量。试验原理：a HBDH试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知a HBDH浓度 的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将a HBDH和生物素 标记的抗体同时温育。小鼠a羟基丁酸脱氢酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和 素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、 B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中a HBDH
2、的浓度呈比 例关系。试剂盒组成：试括童组成40?鑼囲孔凱置保存说明书旳封板膜片(4fi)2片(96)密封袋1个悴犯标包械板1X4B1X96保存标堆品0.沁X菰0. 5ml X L瓶27乜保存标堆品稀輝液1.也XI瓶I- OtElX l2Y保存臨标试利3 “乂嘛SmLXL 瓶保存样品稀释液3 “心瓶S niLX _瓶保存显色制心液3德6 14蒸1瓶AS保存显色制讓3 =1X1SmLXL 瓶i2-眈保存终止鞭3=1裳诫EXL瓶2-&它保存旳咅浓缩洗逢液2ZX嘛SOniL X 1瓶AFC保存自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、lOOul、200、500ul、lOOOul。 振荡器及磁
3、力搅拌器等。密封霧1个规格：96T/48T有效期喋月标准品:72ng/L0.5mlX 1 瓶运输：棍据客户需求而定标本：血清.血浆等其它标本预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可 保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉
4、污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金 属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光 下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后，lOOOxg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-EDTA、柠
5、檬酸盐、肝素血浆可用于检测。lOOOxg离心30分钟去除颗 粒。细胞上清液-lOOOxg离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存-如果样品不立即使用，应将其分成小部分-7O C保存，避免反复冷冻。 尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。 小鼠a羟基丁酸脱氢酶ELISA试剂盒不要在37C或更高的温度加热解冻。应在 室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混 匀。洗涤缓冲液（5Ox）的稀释：蒸馏水5O倍稀释。操作步骤 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大 量的气泡
6、，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建 议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加 入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37C温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重 复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37C温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重 复此操作3次。如果用洗板机洗涤
7、，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀，37C温育10分钟。避免光照。 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预 期浓度相关系数R值为0.990。2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度0D值为纵坐标(Y)，相应的a HBDH标准品浓度为横坐标(X)， 做得相应的曲线，样品的a HBDH含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的 浓度。3、检测值范围：0-80ng/ml4、敏感度：0.1 ng/ml
