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1、实验室高效液相色谱安全使用及注意事项摘要：21世纪以来，全球经济市场飞速发展，实验室的应用频率也逐渐提高。 高效液相色谱是实验室常用的定性和定量分离分析仪器。HPLC由于具有高分离率 和高灵敏度特性在药品、化工、食品、环境和生物分子中应用越来越广泛。近年 来高效液相色谱法在药品检验中的应用更是不断增多,2010年版中国药典高 效液相分析方法约2000种,高效液相色谱为医药业发展发挥重要作用。现在实验 室使用的高效液相色谱多为高性能精密仪器，因此在配件、耗材相对价格比较高， 为了避免能高效液相色谱效能下降，保证高效液相色谱的正常使用，高效液相色谱 使用管理和日常的维护非常必要。关键词：实验室；高
2、效液相色谱；安全使用；注意事项引言结果有效性是实验室的生命线，而测量设备的准确性是保证结果有效性的关 键因素之一，设备准确性主要通过检定、校准等计量溯源方式予以保证。 GB/T270252019检测和校准实验室能力的通用要求6.4.6、RB/T2142017 检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求4.4.3均明确提出， 对测量结果准确性有影响的测量设备应实施计量。国家市场监督管理总局令第39 号检验检测机构监督管理办法第十三条规定，检验检测机构不得出具不实检 验检测报告，检验检测机构出具的检验检测报告，使用未经检定或者校准的仪器、 设备、设施，并且数据、结果存在错误或者无法复核的，
3、属于不实检验检测报告。 该规定进一步明确了测量设备计量溯源工作的重要性。1高效液相色谱简介高效液相色谱技术始于20世纪60年代末期，在气相色谱和经典液相色谱法 基础上发展起来的新型分离分析技术，具有高压、高效、高灵敏度、分析精准、 快速及应用范围广等特点，其仪器主要由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数 据处理系统等组成，各实验室可根据经费及实际需求，还可配置多元泵梯度洗脱 装置、在线脱气机、自动进样器、馏分收集器、柱温控制箱，甚至不同功能的检 测器等。高效液相色谱法按分离原理分类，可分为离子色谱、吸附色谱、分配色 谱、亲和色谱、体积排阻色谱。根据固定相与流动相极性不同，可分为正相色谱 与反相色
4、谱。目前，最常用的是反相色谱，即采用极性流动相和非极性固定相对 样品进行分离分析的方法。2高效液相色谱安全使用高效液相色谱主要分为反相色谱、正相色谱、凝胶渗透色谱等，反相色谱 (RPC)的流动相通常使用的是甲醇和乙腊(ACN)相对比较安全，而正相色谱(NPC)或 凝胶渗透色谱(GPC)中使用的溶剂，如四氢呋喃(THF),二氯甲烷、二甲基亚砜 (DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)需要加强安全和环境管理。如果是二氯甲烷在使用 是有一套特定的规章制度。在处理有毒或腐蚀性化学品时,需要戴上安全眼镜和 手套，且选择与所对应的防护设备;当样品具有呼吸急性毒性时，使用时应佩戴适 当的呼吸保护用具;挥发性、易
5、燃性和有毒有机溶剂应在实验室通风柜处理;在称 重具有潜在致癌性的药物时，应做好防护在应放在手套箱中进行溶解操作;实验过 程中所用的化学品和废弃溶剂应按规范储存和处理。3实验室高效液相色谱安全使用及注意事项3.1实验室检测技术实验室检测技术，涉及容量分析检测、色谱分析检测、光谱分析检测、质谱 分析检测、微生物检测等。近年来，随着科技的不断革新，实验室检测技术也不 断飞跃，分析手段也变得越来越多样化，既出现了很多便携式快速检测仪器及速 测试纸，又推出了多种分析方法联用技术，提高了实验室检测的效率，节约有机 试剂的使用，增加了数据的可靠性。参加质量安全控制的各级实验室可以根据实 验室建设情况选择合适
6、的检测方法。如今，我国的农业发展已经步入全面推进农 业现代化和实施农业供给侧结构性改革的新阶段，面对质量安全的更高要求，我 们不仅要在政治上群力群策，也要在技术上保持高标准，随着检验检测技术的不 断更新，各级实验室可选择适合自己实验室的检测方法，保质保量完成的实验室 检测工作，为我国的质量安全保驾护航。3.2脱气系统使用、注意事项和维护超声脱气后的溶剂将在几个小时内“气泡的重生”，可能导致混合错误，在线 真空脱气机的使用，避免“气泡的重生”带来的影响。在线真空脱气机使流动相 的脱气变得简单方便。为了有效脱气，所有四条管线都应注入溶剂。脱气机中的 真空膜管是分正相反相的，通常的液相脱气机的真空膜
7、管是反相脱气膜，适用于甲 醇和乙腊等有机系溶剂，如使用正己烷等小极性的溶剂，在实验结束后一定要尽快 用甲醇等溶剂将真空膜管的小极性溶剂替换出来，最好的方法按液相使用的流动 相配置相应的脱气机或脱气机内同时配置正相和反相真空膜管。3.3训练和规范基本实验技能和操作方法在高效液相色的实验教学中，常见的问题有物质的称量是否合理、流动相过滤膜的选择是否合适、色谱柱方向是否相反、平衡时间是否充足等，试验人 员只有分掌握了这些细节要点，才能更好的开展实验，否则在后续的实验中就很 难获得理想的实验结果。因此，某开放项目基础实验部分以HD13菌株发酵产物、 银杏内酯、银杏黄酮及银杏有机酸的测试为实例，共涉及6
8、个实验内容，分别是: （1）流动相的配备及基本设备的准备与使用；（2）不同样品的预处理；（3）色谱柱 的安装与拆卸；（4 ）分析系统的开启及注意事项；（5）色谱柱的平衡及冲洗；（6） 色谱图的处理。目的主要是培养试验人员基本实验技能和正确操作方法，为获得 正确的实验原始数据和开展设计型综合实验奠定基础。由于试验人员对高效液相 色谱仪操作比较生疏，因此，实验前先让试验人员掌握实验的基本原理和试验方 法，并重点讲解容易出错的环节或步骤，使试验人员能够对比和分析正确和错误 的操作，加深试验人员学习印象。3.4进样系统使用、注意事项和维护高效液相色谱进样系统的进样器分为自动进样和手动进样;在样品进样时
9、，样 品通常要进行过滤，尼龙膜作为通用过滤膜，可以水溶、有机和水/有机混合样品。 水溶样品过滤时一般选择混合纤维素酯膜，而有机体系样品过滤使用PTFE或PVDF 过滤膜。使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液清洗进样针，洗 针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品润洗进样针（3遍以上），并 排除针中的气泡;手动进样的准确度和重复性一般低于自动进样器，在手动进样时 操作人员的技术熟练度很重要。自动进样器的洗针液通常选择50%甲醇或乙腊溶 液。样品分析前对注射器进行吹扫，以去除注射器中的气泡,进样前后用样品润洗 注射器（3遍以上）。样品瓶装满足够的样品溶液，通常2mL进样瓶中样
10、品体积不小 于0.5mL。自动进样量一般范围为550uL,随着进样体积的增大，峰面积精度增 加，由于自动进样器马达精度有限（精度为0.01UL），如果进样量5L可能导致 检查的精度降低。结语高效液相色谱是一种多用途的分析仪器，在过去的50年高效液相色谱不断改 进,使其更加精密、准确和便利。本文介绍了高效液相色谱安全使用及各模块使 用的注意事项。做好高效液相色谱日常管理及维护,可以有效的提升高效液相色 谱使用效率，发挥其在实验室的作用。参考文献1 杨玉娟.高效液相色谱仪的维护及使用注意事项J.现代食 品，2015（19）:66-68.2 张艳丽，金艳春,王海君，等.高效液相色谱法测定柴油中芳烃含量J.炼油与化工,2006,17(2):52-53.
