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1、实验一 糖类的性质实验（一） 糖类的颜色反应一、 实验目的1、 了解糖类某些颜色反应的原理。2、 学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。二、 颜色反应（一） -萘酚反应1、 原理 糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。2、 器材试管及试管架，滴管3、 试剂莫氏试剂：5-萘酚的酒精溶液1500mL.称取-萘酚5g，溶于95酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。1葡萄糖溶液100 mL1果糖溶液100 mL1蔗糖溶液100 mL1淀粉溶液100 mL0.1糠醛溶液10
2、0 mL浓硫酸 500 mL4、 实验操作取5支试管，分别加入1葡萄糖溶液、1果糖溶液、1蔗糖溶液、1淀粉溶液、0.1糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。观察记录各管颜色。（二） 间苯二酚反应1、 原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。2、 器材试管及试管架，滴管3、 试剂塞氏试剂：0.05间苯二酚盐酸溶液1000 m
3、L，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。1葡萄糖溶液100 mL1果糖溶液100 mL1蔗糖溶液100 mL4、 实验操作 取3试管，分别加入1葡萄糖溶液、1果糖溶液、1蔗糖溶液各0.5 mL。再向3支试管中各加入塞氏试剂5 mL，充分混合。将试管同时放入沸水浴中，。观察记录各管颜色。(二)糖类的还原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的还原性质；2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。3、了解斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理。二、实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+
4、、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。三、器材试管及试管架，水浴锅 电炉四、试剂 1 斐林试剂甲液 氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液。 乙液 硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液。2 本尼迪克特试剂3 1葡萄糖溶液100 mL4 1果糖溶液100 mL5、1蔗糖溶液100 mL五 实验操作六 思考题1、斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理是什么？2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。实验二 总糖的测定-蒽酮比色法 一、实验目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、实验原理 强酸可使糖类脱水
5、生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10-100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 .仪器 (1) 分光光度计 (2) 电子顶载天平 (3) 三角瓶： 50m1 X 1 (4) 大试管： 9 支 (5) 试管架，试管夹 (6) 漏斗，漏斗架 (7) 容量瓶： 50 m1 X 2 (8) 刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 (9) 水浴锅 2
6、.试剂 (1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2) 浓硫酸 (3) 蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100ml浓 H2SO4中当日配制使用。 3 .材料 小麦分蘖节（或者其它材料）。 四、操作步骤 1 .葡萄糖标准曲线的制作 取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各
7、管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 1g, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1 ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml 已稀释的提取液于大试管中，加入4.Oml 蒽酮试剂，以下操作
8、同标准曲线制作。比色波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。 查表所得糖含量(ug)稀释倍数 五、结果处理 六、注意事项 1 该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 H 2 SO 4 要用高纯度的。 3 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1蒽酮比色测定糖的原理是什么？2 用水提取的糖类有哪些？3 制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项？4 分光光度计的原理是什么？使用时需要注意哪些？实验三 粗脂肪的提取和定量测定一 实验目的1.学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。2.熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处
9、理、定量转移、烘干、恒重等。二 实验原理本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。三 仪器、试剂和材料1 .仪器索式提取器，分析天平，烧杯，烘箱，干燥器，恒温水浴，脱脂棉，脱脂滤纸，镊子2 试剂和材料石油
10、醚 芝麻或者花生等油料种子。四、实验步骤1.样品的准备将花生在80度烘箱内烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管内。注意勿使纸包内样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管内，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中2.抽提2.1洗净提取瓶于105度烘干至恒重，记下其重量。装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。2.2 加热提取：使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，用滤纸粗略判断脂肪是否提取完全。2.3 蒸去石油醚，烘干至恒重。3.称量计算 粗脂肪%=
11、脂肪重样品重100%思考题1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？2、做好本试验应注意哪些事项？3、本实验装置磨口处为什么不能涂抹凡士林或真空脂？实验四 总氮量的测定凯氏定氮法一、实验目的1、学习微量凯氏定氮法的原理2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氮基酸等）的含氮量。天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反
12、应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氮，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量，一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2-5.6，将NH4H2BO3的蓝色滴至原来H3BO3的蓝紫色即为终点。本法适用范围0.2-1.0毫克氮。相对误差应小于2%。三、材料、试剂与器具（一）材料人的血清或猪的血清（二）试剂1、浓硫酸
13、（化学纯）2、30%氢氧化钠（分析纯）溶液3、0.9%NaCl溶液4、硫酸钾硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜（CuSO4、5H2O）以3：1（W/W）的配比混合研磨成粉末。5、2%硼酸6、混合指示剂的配制：方法一：取50毫升0.1%甲烯蓝无水醇溶液与200毫升0.1%甲基红无水乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏。方法二：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10毫升与0.1%甲基红乙醇溶液2毫升混和即成。本指示剂的变色范围为 紫红色 灰色 绿色70.01M HCl8. 硼酸一指示剂混合液：取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即
14、可。（约加1毫升左右混合指示剂）9.标准硫酸铵溶液（0.3毫克氮/毫升）（三）、器具1、 凯氏烧瓶2、 消化架3、 吸量管（1毫升、2毫升）4、 量筒（10毫升）5、 凯氏定氮蒸馏装置6、 微量滴定管（3毫升、5毫升，可读至0.02毫升）7、 锥形瓶（50-100毫升）8、 容量瓶（50毫升）四、操作步骤（一）样品的处理血清样品：取人血（或猪血），放于离心管中，于冰箱中放置过液，次日离心除去凝血块，上层黄色透明清液即为血清。准确吸取血清1.0毫升加入0.9%NaCl 4.0毫升，仔细混匀备用。固体样品：某一固体样品中的含氮量是100克该物质（干重中所含氮的克数）来表示（%）。 因此在定氮前，应将固体样品中的水份除掉。一般样品干燥的温度都采用105，因为非游离的水都不能在100以下烘干。在称量瓶中称入一定量的磨碎的样品，然后置105的烘箱内干燥4小时。用坩埚将称量瓶放入干燥器内，待降至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。每干燥1小时后，称量一次，直到两次称量的数量不变，即达恒重。（二）消化取2个50毫升的凯氏烧瓶，向第一号烧瓶内加2毫升稀释血清溶液（或4毫升核酸制品溶液，或200毫克固体粉末）。注意，用吸量管直接将溶液（或用试管加入固体样品）加至烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上，向2号烧瓶加入2毫升水作空白对照。在每个烧瓶内加入硫酸钾硫酸铜混合物约0.2克，浓硫酸3毫升，小瓷片两粒
