《western转膜条件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《western转膜条件（13页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、.western转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称可：一些转录因子蛋白分子量：4070 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流400 mA转膜时间：6090 minPS.其实吧，以我的经历来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是则重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：皮细胞 总蛋白蛋白名称可：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压 100 V转膜时间：6070 min设
2、备名字是“Bio-Rad mini。蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白蛋白名称可：蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB用膜类型、孔径：PVDF预先用甲醇处理转膜方式恒压、恒流：半干转 恒压 12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini建议：最开场做过湿转过夜的那种，太费事费时，效果也不如半干转。蛋白来源：293T细胞蛋白名称可：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。转膜时间：70 min蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称可：转录因子蛋白分
3、子量：33 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式恒压、恒流：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad说明：一样条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称可：smad3蛋白分子量：54 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式恒压、恒流：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称可：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜
4、转膜方式恒压、恒流：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称可：蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KDWB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜转膜方式恒压、恒流：湿转，恒流一膜0.26 A，两膜0.3 A。转膜时间：90 min设备：“Bio-Rad mini建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。蛋白来源：大鼠PBMC蛋白名称可：蛋白分子量：55 KDWB用膜
5、类型、孔径：0.22的PVDF膜转膜方式恒流：湿转转膜时间：60-90 min设备：“Bio-Rad mini建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经历，转膜时间、电压其实也有很大围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最适宜，曾经做过一膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称可：蛋白分子量：大于250 kDWB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：湿转，恒流0.3A。转膜时间：180min设备：“Bio-Ra
6、d 建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。蛋白来源：白血病细胞蛋白名称可：蛋白分子量：28 KDWB用膜类型、孔径：0.45的NC膜转膜方式恒流：湿转，90 min，0.25 A设备：“Bio-Rad 建议：海绵厚度要适宜，一次转磨用的海绵太薄，导致治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称可：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200 KDaWB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：120 v 恒压转膜时
7、间：120 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用2次，根本都转上，5%BSA封闭，减少背景。蛋白来源：胰腺细胞蛋白名称可：*蛋白分子量：90-130 KDaWB用膜类型、孔径：PVDF膜转膜方式恒压、恒流：250 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转蛋白来源：原核表达蛋白名称可：蛋白分子量：38 KDWB用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式恒压、恒流：湿转 恒压：100 V转膜时间：120 min蛋白来源：心脏蛋白名称可：蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDaWB用膜类型、孔径：PVDF转膜方式恒压、恒流：恒压转膜时间：70 v1
8、20 min，180 min，5-6 h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向可选：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足够，40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa ，70 v，120-180 min足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称可：蛋白分子量：53 KDWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：恒压转膜时间：80 V 100 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：人宫颈癌HELA细胞总蛋白蛋白名称可：-actin蛋白分子量：42WB用膜类型
9、、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：恒压转膜时间：50 4 h转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：脑组织蛋白名称可：蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KDWB用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um转膜方式恒压、恒流：半干转 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2转膜时间：不定转膜设备：六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数
10、的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率尤其是使用后期的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。蛋白来源：CHO cell蛋白名称可：酶原蛋白分子量：40 KDWB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜Biorad转膜方式恒压：100 V，湿转，转膜时间：60 min。设备：Tanon天能建议：1. 转膜液现用现配，用完倒掉。2. 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。蛋白来源：Hepg2蛋白名称可：EGFR蛋白分子量：170kdWB用膜类型、孔径：pvdf 0.45转膜方式恒压、恒流：24V转膜时间：2个半小时转膜设备：伯乐半干转蛋白来源：肝癌细胞
11、蛋白名称：HIF-1蛋白分子量：120 kDWB用膜类型、孔径：NC膜转膜方式恒压：80伏，湿转转膜时间：150分钟设备：“Bio-Rad mini建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量围：170-36 kD。蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称可：蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KDWB用膜类型、孔径：NC膜 0.2 um转膜方式恒压、恒流：恒压转膜时间：70 V 200
12、 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建 议：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml。对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。蛋白来源：肺脏蛋白名称可：ICAM-1蛋白分子量：85110 KDWB用膜类型、孔径：0.22NC转膜方式恒压、恒流：湿转 恒流 300 mA转膜时间：120 min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的santa cruz 1 mL包装的。 比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称可：蛋白分子量：16 KD
13、aWB用膜类型、孔径：0.2 um PVDF膜转膜方式恒压、恒流：0.2 A恒流转膜时间：65 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称可：蛋白分子量：28 KDaWB用膜类型、孔径：0.2 umPVDF膜转膜方式恒压、恒流：0.25 A恒流转膜时间：60 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称可：蛋白分子量：80 KDWB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜转膜方式恒压、恒流：半干转移系统恒流，勿超过0.85 mA/cm2，同时转多膜电流需累加串联转膜时间：60-90 min设备：Bio-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的
14、蛋白分子量小，则转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称可：*蛋白分子量：17-116 kdWB用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：恒流 200 mA转膜时间：3 h转膜设备：湿转 六一 24D mini蛋白来源：CO COS7 293T蛋白名称可：蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KDWB用膜类型、孔径：0.45 um PVDF膜转膜方式恒压、恒流：湿转 90 V 电流约为230-280 mA之间。两膜串联叠加。转膜时间：40 min设备：Bio-Rad 法码西亚蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称可：磷酸化蛋白蛋白分子量：30-60 KDaWB用膜类型、孔径：pall NC膜 0.45 um转膜方式恒压、恒流：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜转膜时间：60-90 min转膜设备: 六一 半干转建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果
