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1、人凝溶胶蛋白(Gelsolin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T30pg/ml-800pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中凝溶胶蛋白(Gelsolin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人凝溶胶蛋白(Gelsolin)水平。用纯化的人凝溶胶蛋白(Gelsolin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入凝溶胶蛋 白(Gelsolin)，再与HRP标记的凝溶胶蛋白(Gelsolin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复 合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
2、用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的凝溶胶蛋白(Gelsoli n)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人凝溶胶蛋白(Gelsolin)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X1 瓶7终止液6ml X1 瓶2酶悔标试剂6ml X1 瓶8标准品(1600pg/ml)0.5ml X1 瓶3酶降标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5ml X1 瓶4样羊品稀释液6ml X1 瓶10说兑明书1份5显艮色剂A液6ml X1 瓶11 封寸板膜2张6显艮色剂B液6ml X1/瓶12 密苔封袋1个标本要求1 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提
3、取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800pg/ml5号标准品150卩的原倍标准品加入 150 标准品稀释液400pg/ml4号标准品150 的5号标准品加入 150 标准品稀释液200pg/ml3号标准品150 的4号标准品加入 150 标准品稀释液100pg/ml2号标准品150 的3号标准品加入 150 标准品稀释液50pg/ml1号标准品150 的2号标准品加入 15
4、0 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩l待测样品孔中先加样品稀释液40卩l然后再加待测样品10卩1（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37C温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50卩,空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色
5、：每孔先加入显色剂 A501,再加入显色剂 B501,轻轻震荡混匀，37 C避光显色 15分钟.10终止：每孔加终止液50 ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂+ 37*C反应30分钟洗板5次，加入显色液爪B, 37匸显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或
6、用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的 0D值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（x nx。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。 7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8 C。2有效期： 6个月
