薄层色谱总结

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1、薄层色谱方法总结1. 方法原理（1）流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。（2）样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极-（诱导）-偶极相互作用， 氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。2. 溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰 乙酸-水=4： 1： 1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯+ 2 ml甲醇）。其总量应足以 使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如需分层， 则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。一、溶剂选择规则：1、考虑分离

2、成分的极性、溶解度、吸附度。2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就 首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。6、一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂，如果有分 开的迹象，再调整比例（或者加入第三种溶剂），达到最佳效果；如果没有分开的迹 象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。二、展开剂的选择条件： 对的所需成分有良好的溶解性；可使成分

3、间分开； 待测组分的日三在之间，定量测定在之间； 不与待测组分或吸附剂发生化学反应；沸点适中，黏度较小；展开后组分斑点圆且集中；混合溶剂最好用新鲜配制。三、溶剂极性参数表环已烷：、石油醚（I类，3060C）、石油醚（II类，6090C）、正已烷:、甲苯:、二 甲苯:、苯:、二氯甲烷:、异丙醇:、正丁醇:、四氢呋喃:、氯仿:、乙醇:、乙酸乙酯:、 甲醇:、丙酮:、乙腈:、乙酸:、水：1、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙 醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜 类等的分离；2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，

4、由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节， 适合于蒽醍、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性 很大的生物碱类化合物的分离。四、展开剂的选择物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷 为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。 以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。1、类极性较小的挥发性物质冰片：石油醚(3060C)一醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯一醋酸乙酯(9:、a-香附酮：苯一醋酯乙酯一冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷一醋酸乙酯(3:

5、1)，结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作 用，而用醋酸乙酯为调节Rf (比移值)的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的 影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。2、类极性较小的不挥发性物质B -谷甾醇：环己烷一醋酸乙酯一甲醇(6:1)或者环己烷一丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯一醋酸乙酯一冰醋酸(12:4:、齐墩果酸：氯仿一甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿一乙醚一冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯一醋酸乙酯一甲醇(15:2:或者苯一乙醇(8:1)、丹参酮IIA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)靛玉红、靛

6、蓝氯仿一乙醇(9:1)或者苯一氯仿一丙酮(5:4:1)结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性 小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分 子量减小、母核结构中不饱和健的增加(尤其是出现苯环)，极性基团的增加，都使极 性增加，展开剂极性也增大。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可 以从环己烷一甲苯一二甲苯一苯一氯仿的顺序，按照极性要求选择。这里注意， 异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢， 造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯一 甲醇一丙

7、酮一乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以 明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容 易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。由于存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小。展开剂中使用极性大的有机溶剂（氯 仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另 外也可以抑制硅胶羟基的作用，减少拖尾。由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸 的使用是有限度的。3、类极性大的小分子有机酸：没食子酸：氯仿一醋酸乙酯一甲酸（5:4:1）、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、 异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小

8、部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就 增加，展开剂极性也增加了。依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应 展开剂分别为：正己烷一乙醚一冰醋酸（5:5:、苯一冰醋酸一甲醇（30:1:3）、氯仿一甲醇 一甲酸（9:1:）、石油醚一乙酸乙酯一甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯一甲酸一水（7:。 结论：这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸 基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多，极性大。注意甲酸通常指的是浓度85% 左右的，含有水。4、类含氮有机物：盐酸小檗碱：苯一醋酸乙酯一甲醇一异丙醇一浓氨试液（12： 6： 3： 3：（氨蒸气饱和）或 正丁醇一冰

9、醋酸-水（7:1:2）、麻黄碱：氯仿一甲醇一浓氨试液（20:5:或正丁醇一冰醋酸一水（8:2:1）甘草酸铵：醋酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水（15:1:1:2）。结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。对于极 性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分， 则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土 或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。的通用显色方法理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜

10、色 的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重 要，通用显色方法主要有：1、紫外照射法：方便、不破坏样品；2、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用；3、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。4. 薄层层析和纸色谱操作注意事项1、点样 点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边，样点直径一般不大 于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样， 但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，

11、 而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm 为宜，密封，待展开至规定距离（一般为815cm），取出薄层板，晾干，待检测。注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15 一30分钟。3、显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法 或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试 剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外 光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254

12、nm紫外光灯下观察荧光 板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。把我的祖传秘方告诉你吧PE（60-90）EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:1 8年来我用这四种体系，没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸乙酯：环已烷，不断调 节比例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。我用了好几年了，都还好。不妨一试！铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸 发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1： 23，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶 液=1:2。研磨匀浆

13、的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆 下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚 度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的 质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。点样尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小， 展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大， 点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的 薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。展开剂配制选择合适的量器

14、把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果 分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开 缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶 剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度， 比如：取1m l的溶剂，应使用1m l的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数 时候这不是必须的。展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂， 另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖 子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，

15、防止边沿效应，饱和 时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与 蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在 低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选 择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿 度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。显色喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。solventpolarit yViscosity（cp20C）Boilingpoint（C）UVcutoff（nm）i-pentane（戊烷）-30-n-pentane36210Petroleum ether（石油醚）30-60210Hexane（己烷）69210Cyclohexane（环己烷）81210Isooctane（异辛烷）99210Trifluoroacetic acid（三氟 乙酸）-72-Trimethylpentane（三甲基戊 烷）99215Cyclopentane（环戊烷）4921