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1、植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）2010-04-04 22:43:32 来源：易生物实验 浏览次数：221 网友评论 0 条糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同 成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、 蔬菜品质的咼低。关键词：可溶性测定含量植物可溶性糖含量测定蔥酮法solublesugar新陈代谢一 、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载 培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的 测定，可以
2、了解和鉴定水果、蔬菜品质的咼低。二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：AIIHOCHAOOH OHOH OHHOCHCH OHC：H- -H浓 H2SO4HCH CHCHOCH C- CHO + 3H2O戊糖HOCHCHOHCH- CH浓 HjSO4HOCH：CH CHCHOCCHO + 3H2O径甲耳糠醛J R J -I,. 1 R d I g I糠醛或羟甲基糠醛进一步与蔥酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有 最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。 此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的 测定等优
3、点。三、实验材料、仪器及试剂1材料：白菜叶、柑桔2. 仪器：分光光度计 恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml容量瓶刻度试管 试管架 剪刀 研钵3. 试剂：（1）200“g/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。（2）蔥酮试剂：1g蔥酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（ 3）浓硫酸四、实验方法1 .葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蔥酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后，打开试管塞，置 沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却至室温，在 62
4、0nm 波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸1 0分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。3糖含量测定 用移液管吸收 1ml 提取液于 20ml 具塞刻度试管中，加 1ml 水和 0.5ml 蒽酮试剂。再缓慢加 入5ml浓H2SO4 （注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再 置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml
5、蒸馏水与0.5ml蔥酮试剂混合，并一同于沸水浴保温 10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应 的葡萄糖含量（“g。五、结果计算样品含（g/lOOg） 查表所得橢含& （Pg） 乂稀释倍数=样品重（g） XW6X10六、附注（1）加浓h2so4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况， 应迅速用自来水冲洗。（2）水浴加热时应打开试管塞。苯酚法测定可溶性糖原理：植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测 定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛（分子 式见蔥酮法）能与苯酚缩合成一种橙红色
6、化合物，在10100mg范围内其颜色 深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此 波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂 便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定 160min 以上。二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜的植物叶片。（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 水浴锅；3. 刻度试管；4. 刻度吸管。（三）试剂：1.90%苯酚溶液 称取90克苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解， 在室温下可保存数月；2. 9%苯酚溶液取3ml90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml, 现配现用；3.浓硫酸（比重1.
7、84）； 4. 1 %蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在80C下 烘至恒重，精确称取1.000克。加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml 浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5. 100ug/L蔗糖标准液精确吸取1 %蔗糖标准 液 1ml 加入 100ml 容量瓶中，加水至刻度。三、实验步骤1. 标准曲线的制：向试管内加入1ml9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5 20S加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在室温下放置30min,比色。 然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。2. 可溶性糖的提取取：取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10 0.30g，共3份（或干材料），分别放入3支刻度试管中，加入510ml蒸馏水， 塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶 中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。3. 测定 吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，同制作标 准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度。由标准 曲线查出糖的量。四、结果计算按下式计算测试样品的糖含量：可溶性糖含量（）=从标准曲线查得糖的量（pg） x提取液体积（ml） x稀释倍数/测定用样品液的体积（ml）x样品重量（g）x106x100
