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1、液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键。一、液相色谱柱的安装：液相色谱柱的结构：空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外 螺纹，另一端是3 / 16英寸的内螺纹（国内外已规范化）。7/16英寸外螺纹与1 /4英寸柱管（6.35mm）连接，中间放置压坏用于密封。3 / 16英寸的内螺纹 与1/16英寸（1.57mm）的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。 为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用1.57mm连接管通过空心螺钉 压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在 连接管上（连接管通
2、过压环后露出的管长度应严格控制在2 .5mm长或其他固定 尺寸）。在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片（或滤网），用于封堵柱填 料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般 的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱 及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。柱填料：液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类 是依据填料类型而定。正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直 径在3-10 um的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-CN , -NH2等官能 团即所谓的键合相硅胶。反相柱：主
3、要是以硅胶为基质，在其表面键合十川完基官能团ODS）的非极 性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3-10 um之间。色谱柱的安装：1、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶 剂。2、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。3、按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出 口相连接（如条件允许，建议在柱前使用保护柱）；柱的出口与检测器连接。连接 管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心 螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺
4、钉、 压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手 继续顺时针拧1/4-1/2圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后 有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧1/4圈，直至不漏液为止。二、液相色谱柱的使用：色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评 价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温 等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的 条件进行（出厂测试所使用的条件是最佳条件），只有这样，测得的结果才有可比 性。1、样品的前处理:2、最好使用流动相溶解样品。3、使用予处理柱除去样品中的强极
5、性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。4、使用0.45um的过滤膜过滤除去微粒杂质。流动相的配制:液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到 分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：1、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长 时间保留在柱中）。2、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应（特殊情况除外）。3、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效 果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动 相的黏度）。4、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好 使用对紫外吸收较低的溶剂配制。5、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。6、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体 既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可 得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。 对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml / min ,对于内径为4.0mm柱， 流速0.8ml / min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方 法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量）。
