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1、XXXX 含量测定分析方法验证方案人员姓名部门签名/日期起草人分析部审核人分析部审核人信息注册部批准分析部XXX 医药科技有限公司目录1. 验证目的12. 方法简介与验证范围 13. 验证小组成员 14. 验证条件15. 分析方法 26. 系统适用性试验37. 专属性48. 线性 69. 精密度（重复性）710. 精密度（中间精密度）811. 溶液稳定性812. 耐用性913. 样品检测1014. 变更记载 101. 验证目的通过对 xxxx 含量测定分析方法验证，确定该测定方法在指定的测定系统下可 以用于产品的放行以及稳定性检测，保证含量测定检验数据的准确性，并对每个 验证参数设立可接受标准
2、。2. 方法简介与验证范围xxxx 含量测定分析方法（见附录方法）为高效液相色谱法，方法验证的内容 包括:系统适用性、专属性（杂质定位、强制降解试验）、线性及范围、精密度（重 复性和中间精密度）、溶液的稳定性及方法的耐用性。3. 验证小组成员序号部门成员职务职责1分析部XXX分析员起早验证方案2分析部XXX分析组长审核验证方案3QAXXX研发QA审核验证方案4分析部XXX项目经理实施验证方案4. 验证条件4.1 仪器设备仪器名称型号厂家液相色谱仪Agilent 1260安捷伦科技有限公司Agilent 1200安捷伦科技有限公司电子天平XP205梅特勒-托利多集团色谱柱Agilent ZORB
3、AX SB-C18迪马科技pH计PH-1梅特勒-托利多集团4.2对照品、供试品及试剂4.2.1 对照品及样品名称批号含量来源XXXX对照品XXX100.0%USP杂质AXXX100.0%USP杂质BXXX100.0%USP杂质CG0I370100.0%USP杂质D13031201100.0%USP4.2.3 试剂名称级别生产企业甲醇HPLC默克公司乙腈HPLC默克公司磷酸AR国药集团化学试剂有限公司氢氧化钠AR国药集团化学试剂有限公司盐酸AR国药集团化学试剂有限公司30%过氧化氢AR国药集团化学试剂有限公司水纯化水自制5. 分析方法5.1 缓冲盐的配制取磷酸lml,加纯化水1000ml,混合均
4、匀，即得。5.2 稀释液的配制按乙腈:甲醇:水=5:35:60配制稀释液,混合均匀。5.3 对照品溶液的配制取xxxx对照品约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声/ 振摇使之溶解,用稀释液稀释至刻度,摇匀,即得。5.4 供试品溶液的配制取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声/振摇使 之溶解,用稀释液稀释至刻度,摇匀,即得。5.5 分离度溶液的配制分别取XXX、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D各6mg,置50ml量瓶中， 加入适量稀释液,超声/振摇使之溶解,用稀释液稀释至刻度,摇匀,即得杂质贮 备液；取xxxx约*mg，置50ml量瓶中，加入适量稀
5、释液，再加入0.5ml杂质贮 备液,超声/振摇使之溶解,用稀释液稀释至刻度,摇匀,即得。5.6系统适用性要求取对照品溶液连续进样5次的结果，其峰面积测量值的RSD不大于1.0%,主 成分峰保留时间RSD应不低于1.0%；主成分峰拖尾因子应不得大于1.5。5.7 色谱条件以 Agilent ZORBAX-SB C18 (4.6x250mm, 5 “m)为色谱柱；流速为 1.0ml/min； 柱温为40C；检测波长为250nm；运行时间40min；流动相A： 0.1%磷酸溶液600ml，甲醇350ml，乙腈50ml，混匀即得。流动相B： 0.1%磷酸溶液150ml，甲醇800ml，乙腈50ml，混
6、匀即得。按下表进行梯度洗脱。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0100051000205050305050311000401000精密量取空白稀释液、对照品溶液和供试品溶液各10山，注入液相色谱仪,记录色谱图。5.8 计算公式含量测定计算公式如下：校正因子f=对照品m对照品xa对照品对照品对照品xA对照品fxA供试品含量（%） =供试品xV供试品m供试品x（1-水分）x100%其中：m对照品、m供试品分别为对照品、供试品取样量，mg；对照品供试品a 对照品为对照品的含量， %；对照品V 对照品、 V 供试品分别为对照品、供试品稀释倍数；对照品供试品A对照品、A供试品分别为对照品、供试品峰
7、面积;对照品供试品水分为各批次供试品实际测得水分含量（%）。5.9 含量要求本品按无水物计，含 xxxx 应在 98.0%102.0%。6. 系统适用性试验6.1 溶液配制空白溶液：同稀释液（乙腈：甲醇：水=5:35:60）。对照品溶液配制：取xxxx对照品约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。6.2 进样程序空白溶液 1 针，对照品溶液进样 5 针，记录色谱图。6.3 可接受标准取对照品溶液连续进样6次的结果，其峰面积测量值的RSD不得大于2.0%, 主成分峰保留时间RSD应不大于1.0%；主成分峰拖尾因子应不得大于2.0；
8、主峰 和杂质峰基线分离；理论板数应符合质量标准规定。7.专属性采用DAD（Agilent液相色谱仪）检测器，对供试品的主成分峰纯度进行检测， 检测波长范围在190 nm400 nm。7.1 选择性及干扰试验7.1.1 已知物质定位溶液的配制xxxx对照品定位溶液的配制：取xxxx对照品约*mg，置50ml量瓶中，加入 适量稀释液，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。各杂质定位溶液的配制：取XXX、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D约6mg， 分别置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度, 摇匀。分离度溶液配制：取xxxx约*mg，置50ml量瓶中，加入适量
9、稀释液，再加 入0.5ml各杂质定位溶液，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即 得。供试品溶液：取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液, 超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。xxxx粗品溶液：取xxxx粗品约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量 稀释液，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。 7.1.2进样程序分别取空白溶液、各定位溶液、分离度溶液、粗品溶液、供试品溶液，分别 进样 1 针，注入配置 DAD 检测器的液相色谱仪，记录色谱图。7.1.3 数据有效性满足系统适用性要求。7.1.4 可接受标准7.1.4.1空白
10、溶剂不干扰主成分检测；7.142分离度溶液、粗品溶液、供试品溶液中主成分与相邻杂质见分离度应大于2.0；7.1.4.3分离度溶液、粗品溶液、供试品溶液色谱图中主成分色谱峰纯度因子应不 低于990。7.2强制降解试验取xxxx,在验证开始10天放置于高温和光照条件下进行强制降解。在稳定性 特征研究中需用DAD检测器检测，检测波长范围在190 nm400 nm。7.2.1 强制降解条件表7-1 XXXX专属性破坏试验配制名称破坏条件未破坏取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声/振 摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；强白 光破 坏溶液取本品约*mg，置50ml
11、量瓶中，用稀释剂溶解后，置5000lx500lx强白 光照射条件下放置7天，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；固体将适量本品于5000lx500lx强白光照射条件下放置7天，取约*mg，置50ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度；高温破坏溶液取本品约*mg，置50ml量瓶中，用稀释剂溶解后，置60C条件下放置7 天，放冷，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；固体取60C条件下放置10天的xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，力口 入稀释液适量，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；紫外破坏溶液取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，置紫外光 下放置7天，
12、用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；固体将适量本品于紫外光照射条件下放置10天，取约*mg，置50ml量瓶中， 用稀释剂溶解并稀释至刻度；酸破坏取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，移取5ml 1mol/L盐酸溶液 到量瓶中，轻微振摇量瓶使样品润湿，盖上量瓶盖，室温下放置7天，在 酸破坏结束时加入5ml 1mol/L氢氧化钠溶液中和，加入稀释液适量，超声 /振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。碱破坏取xxxx约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，移取5ml 1mol/L氢氧化钠 溶液到量瓶中，轻微振摇量瓶使样品润湿，盖上量瓶盖，室温下放置7天， 在碱破坏结束时加入5 ml 1mol/
13、L盐酸溶液中和，加入稀释液适量，超声/振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。氧化破坏取xxxx约*mg,精密称定，置50ml量瓶中，移取2 ml 30%的过氧化氢溶 液到量瓶中，轻微振摇量瓶使样品润湿，盖上量瓶盖，室温下放置16 h。 待氧化破坏完毕加入稀释液适量，加入稀释液适量，超声/振摇使之溶解， 用稀释液稀释至刻度，摇匀。粗品取xxxx粗品约*mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声 /振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得；7.2.2 空白溶液的配制7.2.2.1 酸-碱空白溶液:移取 5ml 1mol/L 盐酸溶液和 5ml 1mol/L 氢氧化钠溶液于同 一
14、50ml 量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。7.222过氧化氢空白溶液：移取2ml 30%过氧化氢溶液于50ml量瓶中，用稀释液 稀释至刻度，摇匀。7.2.3 进样程序上述溶液各进样 1 针；每 12 针进 1 针控制溶液。7.2.4 数据有效性满足系统适用性要求。7.2.5 可接受标准7.2.5.1在所有强制破坏条件下，主成分与相邻的降解产物的分离度大于2.0。 725.2 xxxx主峰纯度因子应不低于990，表明降解产物对xxx无干扰。8.线性xxxx含量分析方法中工作对照品溶液（或供试品）的浓度为600Mg/ml线性 验证范围为对照品溶液浓度的50%150%，在该浓度范围内配制6份浓度不同的 溶液进行验证。8.1 线性试验溶液的配制8.1.1 线性试验贮备液配制取xxxx对照品约60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入适量稀释液，超声 /振摇使之溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。8.1.2线性试验溶液配制按表 8-1 准确移取适量线性贮备溶液（8.1.1）至相应量瓶中，用稀释液稀释至 刻度，摇匀，即得各线性试验
