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1、大肠杆菌 【2】造就一. 菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体造就基离心后在沉淀中参加等量40%甘油,-80C冻存.二. 造就基制备LB造就基配方（胰化蛋白胨（Tryp ton）： 10 g/L;酵母提取物（YeastExtract）：5 g/L;NaCl：10 g/L;pH 7.4）液体造就基胰化蛋白胨10.0g酵母粉5.0g氯化钠10.0g水1000mlpH7.4固体造就基在液体造就基的基本上再参加1.52.0的琼脂三. 平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g,酵母粉5.0g,NaCl 10.0g,参加800mL二次水消融，并 用玻璃棒搅拌平均，用1mol/L的NaOH调pH至7.4阁下，定
2、容至1L,调pH 7.4 （若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）.2）分装在锥形瓶中,每瓶量不宜太多,没过瓶底一指阁下.如需固体造就基在分装后的液体造就基内参加约2%的琼脂（150mL液体造就基参加2.5g琼脂）.3）在锥形瓶口依次笼罩带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸,用皮筋捆好.所有锥 形瓶如上述操作.用记号笔注明造就基名称.配制日期.4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min.5）灭菌后的造就基掏出置电热鼓风湿润器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸湿润 后掏出.液体造就基可直接保存或应用,此时加有琼脂的造就基不会凝固,可 在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将造就基倒入
3、造就皿内，每个造 就皿造就基约10-15mL （直径90mm）,在造就皿中厚度大约4mm阁下.将平皿 叠放在无菌操作台上，放置10min阁下,待琼脂根本凝固可涂平板.6）若平板不直接应用，灭菌后将造就基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波 炉中火加热约3min,使琼脂融化，室温冷却20min至不烫手可制备平板.四. 接种大肠杆菌1）取试验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧,打开离心管.2）接种办法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，扭 转平皿一圈，最后中央划之字;接种办法二：用移液枪汲取100uL溶液于平板 上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板.3）因试验一般都请求挑取单菌落，故涂平板顺应斟酌冻存液内细菌数目，若菌量 过大应恰当稀释.一般办法一获得单菌落的可能性比较大.涂平板应在酒精灯 邻近进行，若冻存液涂完的平板应倒置，防止平皿盖上产生水蒸气.五. 大肠杆菌的造就1）将接种好的平皿倒置放入37C的恒温造就箱中造就，大约十几小时后长出菌落.2）挑取发展状况好,特点显著的单个菌落,接种于新颖灭菌的 LB 液体造就基中37C,220rpm/min恒温振荡造就9T2h.菌落特点：乳白色，圆形,菌落边缘整洁,表面滑腻,表面和背面色彩一致.
