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1、Cell Quest Pr双色淋巴细胞亚群分析样本制备【实验目的】：使用双色组合标记抗体对人外周血中淋巴细胞亚群进行检测，了 解人的免疫状态。从而指导临床诊断和治疗。【实验原理】：利用荧光技术，在不同的鼠抗人的抗体上标上荧光素，此荧光抗 体就同人淋巴细胞表面的CD分子特异性的结合；然后用流式细 胞仪检测，结合分析软件的自动分析，便可以得出各亚群细胞的百 分比。【主要试剂】：1、流式细胞仪(FACSCalibur)、台式离心机、涡旋震荡器，微量 移液器(1000皿、200皿、20皿，流式细胞专用试管、鞘液；PBS (加0.1%叠氮钠)2、双色检测试剂：Isotype Control(MouseI
2、gG1/IgG2a) CD3-FITC /CD19-PE C D3-FITC /CD4-PE CD3 FITC /CD8-PE C D3-FITC /CD16+CD56-PE3、FACS Lysing Solution红细胞裂解液(10X,使用前用蒸馏水 稀释成1X)。4、1%的多聚甲醛配制方法：称1.0克多聚甲醛加少量PBS放入56r水浴箱中使之溶解，用 1N NaOH溶液和1N的HCl调整PH值在6.97.0，然后加入100ml 容量瓶中定容；最后用0.45um的滤膜过滤。【实验步骤】：1、取5支流式试管，编号为1、2、3、4、5，分别取100但抗凝 全血加入每支试管中，不要碰到管壁。2、
3、轻轻混匀，依次加入 20pl 双标 Isotype Control (Mouse IgGJ IgG2a)、CD3/CD19、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+CD56 荧光抗体。室温避光保存20分钟。3、取出试管，每管加入10倍稀释了的1XFACS Lysing Solution 2ml，涡旋混匀，避光10分钟。待管内液体透亮。然后300g 离心5min，弃去上清液。4、每管加入2ml的PBS，涡旋混匀，300g离心5min，弃去上清 液。然后加入0.5ml PBS混匀，4C避光1h内上机检测；若不 能及时上机，加入0.5ml含1%多聚甲醛的PBS,放4C冰箱保 存，48h内上机检测。
