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1、结肠炎大鼠模型作者:日期:4.1材料与方法/4.1.1材料谧（一）实验试剂2, 4, 6-三硝基苯磺酸购于Sigma公司（二）实验仪器同第三章；FCOM-6124型半自动生化分析仪，德国倍肯公司（三）实验日粮组成与营养水平基础日粮按照NRC（1998）营养标准配制，如表4-1。表“人足FI绘庄方士白养戌分耒Tdb-1 C LiLijuatiu1j?匕叹亡：:dizln总料削应IngredLaits营撐术 nutn 亡Lit level s对wmICom (%)7P.2D79.7D蹴蛋白CP（%U.742 7S Bl Scybcan Lneal (%)冷8014 .an曲Hifi ME (MJW
2、cgjHj5114. BD： ?：；%）2.75:工钙 CdC 600.口n 1n 1fliP (%；r：nn-ii0.C40.64董氨醴（鸣；0.65a.(ss0.200.200700.70出种堆生杯!0.2D0.20川|补）0.100.10$胳切l.：01.0：挥粗龍hi0.152.0.420.42鱼油）a.50讣：歸 Tfl：上盘件=塩；聶 2 ： 1 020 OOH U. Hlf- f： 3- 2 000U. Jfcl.jfiD, LDSODDOOIU.B) 15000EU.ELEOOCtU.H B； t 0001U.祖 f Kj : ZOZirj.箱B-. JOu-g 臣解 OOQ1
3、U，堀醍 R 血皿 叶程 500mg .生物斎 300（四）实验动物SD大鼠购于哈尔滨医科大学实验动物中心。4.1.2 方法（一）实验动物分组与处理选取体重22010 g的SD大鼠400只，雌雄各半，分别采用醋酸和TNBS/乙醇两种方 法复制大鼠结肠炎模型。动物饲养于空调室内，室温202C，相对湿度40%-50%，基础日粮 如表4-1，颗粒饲料喂养，自由饮水。将大鼠随机分为4组：1组、II组、III组和W组。I组和 II组造模前饲喂4周鱼油（0.5%的鱼油）后，1组继续饲喂含0.5%鱼油日粮，而II组饲喂基础 日粮；III组在造模后饲喂含0.5%鱼油日粮，而W组造模后饲喂基础日粮。（二）大鼠结
4、肠炎模型的建立通过广泛文献检索和多次预实验结果，我们选取醋酸和2, 4, 6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法 两种方法建立结肠炎大鼠实验模型。醋酸模型的建立参考文献140-1423 / 5，大鼠禁食不禁水24h,乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm，经管内注入10%的醋酸溶液2ml, 10-20S后注入生理盐 水5ml以消除醋酸的作用，自然清醒后放回笼内正常饲养。TNBS/乙醇模型的建立参考文献143复制大鼠结肠炎模型，大鼠禁食不禁水24h，乙醚轻微麻醉后，用外径为2mm的硅胶管插入大鼠肛门内约8cm,经管内注入TNBS/50%乙醇溶 液0.85ml，倒立30s，捏紧肛门平放
5、5min即可，自然清醒后放回笼内正常饲养，实验期为28d。（三）样品的采集与处理分别于模型复制成功第24h、7d、14d和28d后称重、无菌采取血液后处死大鼠。大鼠处 死后，迅速剖取结肠，摘取距肛门6-8cm病变处结肠4-7cm，用于结肠黏膜损伤的观察和结 肠病理学变化的观察。沿肠系膜纵轴剪开肠腔，冰生理盐水冲洗干净后将肠黏膜向上平铺于平板上, 大头针固定后，用放大镜观察炎症及溃疡发生情况（进行肠道黏膜损伤评分观察）。将采取 的部分结肠组织，固定、石蜡包埋，病理切片（HE染色），显微镜下观察大鼠结肠病理学变化 情况（四）观察指标（1）结肠炎大鼠炎症的观察观察记录大鼠体重、饮食、粪便性状、死亡率
6、、稀便发生率、皮毛、活动等情况。同时采 取粪便测定潜血情况（联苯胺冰醋酸法），综合体重、粪便性状及隐血情况对大鼠疾病活动 指数（The Disease Activity Index， DAI）进行评分144（表4-2）；肉眼观察结肠黏膜损伤大体情况，参考结肠黏膜损伤程度评分标准145-148（表4-3）；结肠组织HE染色后光镜下观察结肠组织损伤情况，参考肠组织学损伤评分标准149-150（表 4-4）。表4-2 DAI评分标准Table 4-2 The standards of DAI score评分 体重减轻（）粪便性状粪潜血0 （-）正常正常1 1-52 5-10松软潜血（+）3 11-1
7、54 15稀便肉眼潜血附：粪便性状评分标准（1 ）正常粪便：成形颗粒样粪便；（2）松软粪便：不豁附于肛门的糊状、半成形粪便；(3) 稀便：可豁附于肛门的稀水样便表4-3结肠黏膜损伤程度评分标准Table 4-3 The standards of colonic mucosal injury score评分大体形态0黏膜无水肿、充血及溃疡，肠壁无粘连及增生1轻度的黏膜水肿、充血、无溃疡2黏膜充血、水肿、糜烂、无溃疡3黏膜充血、水肿、糜烂、单个溃疡4黏膜充血、水肿、糜烂、多个溃疡5黏膜充血、水肿、重度糜烂、多个溃疡，有 1cm2溃疡表4-4空沥纺农学摄佈评价切猊Tnb.e -1 A 71:stnE:.r(17:f coLDt:liLS：Dl:g;aJ评并大休胫茫0无犯症丧加L低水平茨症细胞涨润.平出J每卡崙倍吃露対洞的年胞故V：%一 一莒克化.中導程度炎症细删润，平均毎1爲倍视畑润的輛胞JSt 10%-25%.险窝堆宽， T騎吃增厚来超过外根无诺塢.析邯胞沒沏.平均曲和普倍fflfftg汹的熒抑细*18( 2-50%,血皆帝咖加3理壁桂炎应细胞浸润，IF试细剋梢，平均毎牛高儒删咼艮润的细胞數沾Q站，-I血管密度晦刖:.感寓索肚 杨坚全层席厚件肓溃病.(4) 数据处理实验结果以xx 土 S表示，数据统计分析采用SPSS11.5软件进行数据处理。
