《免疫组化的意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫组化的意义（1页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、材料 二甲苯酒精（100，95）EDTA抗原修复工作液（pH8.0,稀释50倍使用）0.5M Tris-NaCI （TBS） pH7.4 （稀释 10 倍使用）DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul,于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60C烘箱中烘烤过夜2. 二甲苯中脱蜡,梯度酒精入水（无水乙醇, 95酒精）,浸泡于蒸馏水中 待用3. 抗原修复取500mlEDTA抗原修复工作液于1000ml烧杯中，在小功率电炉上加热，至似 沸微沸（为了防止脱片）。将组织切片缓慢放入烧杯。继续加热,保持液体在微 沸状态20 分钟。将烧杯移开火源，室温下自然冷却后取出切片，蒸馏水洗1 次 3
2、分钟， TBS 洗2 次每次3 分钟。4.每张切片加一滴或50ul 3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min,以阻断内 源性过氧化物酶的活性。TBS冲洗3次，每次3min。5. 除去TBS液，加一滴或50ul 一抗（灭活PLB免疫小鼠所得到的多抗， 1:3000稀释），阴性对照采用普通血清，室温下孵育2小时，或4C过夜。6. TBS洗3次，每次5min，除去TBS液，每张切片加一滴或50ul poly mere nha ncer （试剂A），室温下孵育20mi n，TBS冲洗3次，每次3mi n。7. 除去 TBS 液，每张切片加一滴或 50ul 过氧化物酶标记的抗鼠/兔聚合物 （试剂B），室温下孵育30min，TBS洗3次，每次3min。8. 除去TBS液，每张切片加一滴或50ul新鲜配制的DAB，显色3 10min。9. 自来水冲洗，苏木素复染10min，水冲洗。0.1%的盐酸分化，自来水冲 洗， TBS 返蓝。10. 不需脱水，直接用中性树脂封片。注意事项 抗原修复时必须保证切片始终能浸泡在液体内，一定要等工作液冷却后才能将切 片取出
