《中国湖北汉族人群对同种异型抗原免疫应答与HLA遗传多态性的相》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中国湖北汉族人群对同种异型抗原免疫应答与HLA遗传多态性的相（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国湖北汉族人群对同种异型抗原免疫 应答与HLA遗传多态性的相关性【摘要】 目的研究个体之间混合淋巴细胞反应强度的差异，探讨 中国汉族人群对同种异型抗原的应答水平与HLA的相关性。方法 在17个家系中进行父/子和母/子间单向混合淋巴细胞培养。结果和结论不同组合的混合淋巴细胞反应强度,即父一子与子-父相比；母一子与子一母相比；父/子间与 母/子间相比，差异均无显著性。个体对同种异型抗原的免疫应答的强度与HLA-I类分子的型别相关,HLA-A10表型阳性个体的刺激指数 SI(0.95 0.24)明显低 于阴性个体(1.41 0.69),差异具有极显著性意义。【主题词】人类白细胞抗原同种异型抗原淋巴
2、细胞 细胞，培养的Associati on betwee n the immune resp onse to alloa ntige ns and the gen etic polymorphism of HLA in a Hubei populati on of the Han natio nalityTU Zhe ngku n, WU Xio ngwe n, LIU Min, et al. Departme nt ofImmun ology, Tongji Medical Un iversity, Wuhan 430030【Abstract 】 Objective To study the
3、 differe nee in the magn itude of mixed lymphocyte culture react ion (MLC) among differe nt in dividuals and discuss the associati on betwee n the immune resp onse to alloantigens and the genetic polymorphism of HLA.Methods Wecarried out the on e-way MLC betwee n pare nts and childre n in seve ntee
4、n Hubei families of the Han n ati on ality.Results and Con clusi onOurresults showed that, the difference in the magnitude of MLC was not sig nifica nt among various associatio ns in clud ing father vs son/son vs father, mother vs son/son vs mother and father vs son/mother vs son. The inten sity of
5、the immune resp onse to alloa ntige ns were associated with the HLA class I phe no type, i nstead of the HLA-DRB1 alleles. The stimulation index (SI) of individuals bearing HLA-A10 antigen(0.95 0.24) was significantly lower (Pv 0.01) than that of HLA-A10negative ones (1.41 0.69).【Subject words 】HLAA
6、lloa ntigenLymphocyteCell,cultured主要组织相容性复合体(MHC最初是在研究器官移植排斥反应的过程中被发 现的,MHC抗原作为代表个体特异性的主要组织抗原，在排斥反应中起关键作 用。本文分析家庭成员间混合淋巴细胞反应的强度，同时进行HLA遗传多态性的家系调查，探讨中国汉族人群对同种异型抗原的应答水平与HLA的相关性，以期为拓宽同种移植供体的选择范围提供实验依据。材料与方法1. 主要试剂：HLA-I类分型血清板(北京中日友好医院HLA配型室);3H-TdR(中科院北京原子能研究所);丝裂霉素C(mitomycin C)、RPMI 1640(美国 GIBCO公司);
7、HLA-DRB1等位基因序列特异性引物(德国Essen大学Grosse- Wilde 教授惠赠)；Taq 酶、蛋白酶K、dNTP、琼脂糖(德国Boehringer Mannheim公司)。2. 研究对象：随机选择湖北省鄂州市汀祖镇王边村 17个健康家系(包括 父、母、子女各一名),米集外周静脉血标本。3. 方法(1) 外周血单个核细胞的分离。(2) HLA- I类抗原分型：采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验。(3) HLA-DRB1基因分型：采用本室参考国外文献所建立的PCR/SSPT法。 混合淋巴细胞培养(MLC)：取上述单个核细胞作为应答细胞(0.5 x 106/ml);取单个核细胞悬液(0
8、.5 x 106/ml)作为刺激细胞，加入丝裂霉素 C(终浓度25卩g/ml),37 C水浴20分钟后取出离心,细胞用RPMI 1640洗涤1次, 离心去上清，重新悬浮于含20% AB型血清的RPMI 1640培养液,调整细胞浓度为 0.5 x 106/ml备用;在同一家系的父/子或母/子间进行单向混合淋巴细胞培养,即 取刺激细胞和反应细胞各0.1ml加入96孔培养板，以自身混合淋巴细胞培养作 为对照(实验组与对照组每份标本均做 3个复孔),37 C 5% CQ培养5天,加入 20卩l浓度为740X 103Bq/ml的3H-TdR(终浓度为37x 103Bq/ml),轻轻摇匀后继 续培养18小
9、时。应用B液体闪烁仪测定每分钟脉冲数(cpm),以下列公式计算 刺激指数(stimulation index,SI):上式中SIAmB弋表A细胞刺激B细胞的刺激指数，即A刺激B反应的cpm值 除以B被自身刺激细胞(Bm)所刺激的cpm值;SIBmA代表B细胞刺激A细胞的刺 激指数，即B刺激A反应的cpm值除以A被自身刺激细胞(Am)所刺激的cpm值。4. 统计学处理：用t检验分析实验结果。17个家系共50例标本的HLA-1类和HLA-DRB的分型结果见表1;17个家 系内各成员间混合淋巴细胞反应的 SI值及比较见表2、3 ;HLA- I类型别与SI 的关联见表4;HLA-DRB1等位基因型别与
10、SI的关联见表5。结果显示，携带 HLA-A10表型者其SI(0.95 0.24)明显低于阴性者(1.41 0.69),差异有极显著 意义(P0.01);HLA-A1、-A2、-A11、-A24、-A25、-A33、-B62、-B46、-B40 等 表型以及HLA-DRB等位基因与机体对同种异型组织抗原的应答水平无明显关 联。本实验检出的其它HLA型别由于频率较低,无统计学意义。表1 HLA-1类表型和HLA-DRB基因型的家系调查Table 1. HLA class I phe no type and HLA -DRB1 allel in family an alysisNo.HLA-AHL
11、A-BHLA-DRB170A2B16 B2771A2B16 B1372A2B16 B13DRB*120X*030173A2B62DRB*070X*090174A25B53DRB*0301*150X75A2 A25B62 -79-B6280A2B4681A2 A24B16 B46DRB*080X82A2-DRB*070X*090183A2-DRB*040X84A2-DRB*070X*040X85A11 A2B12DRB*160X*070X86A2 A10B39DRB*150X 100187A2B12 B39DRB*070X*100188A1 A2B5 B62DRB*070X*140X89A1B5
12、 B4090A2 A1B62DRB*120X*070X91A25B7 B14DRB*070X92A2B5DRB*040X*090193-B5 B14DRB*040X*070X94A10B35DRB*070X*100195A24B40 B4696A10B40DRB*160X*070X97A33B17DRB*0901*070X98A24 A25B46DRB*150X*100199A33 A25B46 B17DRB*150X*0901100A2B46 B17DRB*0301101A1 A2B7 B62DRB*120X102A1 A2B46 B62DRB*120X*0301103-DRB*070X10
13、4-DRB*040X*110X105-DRB*070X*110X106A2B5 B15DRB*150X*120X107A2 A11B5 B46DRB*0901*120X108A2B5109A2 A10B40 B62DRB*080X*0901110A10B40 B17DRB*080X*120X111A2 A10B40DRB*090X*120X112A10 A24B62DRB*0901113A9B40114A9 A10B62 B40115A2 A10B46DRB*080X116A2 A10B39 B27117A2B46DRB*080X*040X118A2 A33B62119A2B62DRB*120
14、X120A2 A33B62121A2B46DRB*080X*0901122A2B62 B39DRB*080X表217个家系中父/子和母/子间单向混合淋巴细胞反应Table 2.The stimulati on in dex(SI) of on e-way mixed lymphocyte react ion( MLR)i n seve ntee n families厂IS VSFMSSMSI70m72=1.68SI72m70=1.20SI71m72=0.71SI72m71=1.31SI73m75=1.38SI75m73=0.81SI74m75=3.39SI75m74=0.39SI80m81=1.25SI81m80=0.54SI82m84=0.54SI84m82=1.49SI83m84=0.61SI84m83=1.86SI85m87=1.32SI87m85=1.00SI86m87=1.31SI87m86=1.04SI88m90=2.55SI90m88=2.16SI89m90=3.51SI90m89=3.37SI91m93=0.88SI93m91=1.02SI92m93=1.06SI93m92=1.10
