《醋酸菌分离及鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《醋酸菌分离及鉴定（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、醋酸菌分离及鉴定一、培养基1、分离培养基（溴甲酚紫显色平板）:葡萄糖1%、酵母膏1%、无 水乙醇3%（体积分数）、0.04%溴甲酚紫5%（体积分数）、琼 脂1.8%、水100 mL，0.1 Mpa 灭菌20 min， 无水乙醇在灭菌 后培养基温度降到75 C左右时加入。2 、保藏培养基: 葡萄糖1%、酵母膏0.5%、琼脂2%、丙三醇2.5%（体积分数）、水100 mL, 121C灭菌20 min备用。3、液体培养基:葡萄糖1%、酵母膏0.5%、丙三醇2.5%（体积分数）、水100 mL,调节pH至6.30, 121 C灭菌20 min备用。二、醋酸菌分离纯化流程样品一醋酸菌发酵液中富集培养一稀
2、释分离一纯化一斜面试管 保藏一产醋酸定性测试。三、步骤1 、菌株分离取1g醋醅样品置入无菌试管，装入9 mL无菌水，振荡均匀后得 到10-1 的稀释液, 之后10 倍梯度稀释直到10-6 稀释度。取 10-2至10-6 稀释度的样品稀释液分别涂布溴甲酚紫显色平板, 每个稀释度涂布2个平板，每个平板涂布0.2 mL的样品稀释液, 涂布完成后30 C倒置培养48 h左右。选取菌落数在30 50个左 右的平板， 挑取该平板上的所有单菌落转入斜面保藏培养基中， 30 C培养24 h左右后保存于4 C冰箱。2 、菌株纯化将试管斜面中的菌株平板划线分离后再转接试管斜面，4 C冰箱保存。3、 菌株归类以上述
3、各菌株划线分离的平板为基准，将形成菌落极 其相似的菌株归为一大类。4 、菌悬液的制备用接种环挑取新鲜培养的斜面菌株半环， 溶于 装有200 |j L无菌超纯水的Eppendorf管中，于试管振荡器上 混匀后得到菌悬液。四、鉴定1、菌株形态特征:镜下细胞呈短杆状,革兰阴性,无芽胞,单个或成 对、成链排列，个体大小为(0. 50. 7)j m X(l. 01. 5)j m。2、培养特征:在葡萄糖、酵母膏、乙醇、CaCO3平板培养基上生长旺盛，菌落圆形、油脂状，表面光滑、凸起，边缘整齐，培养2d能产酸，使CaCO3溶解形成透明圈，继续培养将乙酸氧化分解产生CO2和水，菌落周围出现白色透明。在斜面培养
4、基上生长良好，培养2d后呈油脂状,并产酸。在10% ( v / )乙醇的培养基上、Hoyer2Frateur培养液中、30%葡萄糖培养基上均不生长。五、测试1、产酸量的测定方法取ImL发酵液，加入10 mL蒸馏水，3滴 5 滴0.02%酚酞酒精溶液, 用标定的0. 1 mol/L NaOH 溶液滴定 至浅粉色。由所耗的NaOH溶液的量来计算样品中的含酸量(以 醋酸计)。产酸量(%) =( V- V0) XCNaOHXQ.06X100 %式中：V发酵液样品滴定耗用的NaOH量(mL);V0以空白培养基为对照滴定耗用的NaOH量(mL);CNaOHNaOH标准溶液浓度(mol/L);0.06消耗1
5、 mL 0.1mol/L NaOH 溶液相当于乙酸的质量( g) ;100 %转化为百分含量的系数。六、有关背景1、传统法酿醋过程中熏醋醅料固态发酵大致上可分为3 个阶段:第1阶段是第110天主要为酒化、糖化阶段；第2阶段为醋酸发酵阶段(第1023天)；第3 阶段是第23 28 天主要为传统酿醋过程中熏醋的后熟阶段。后熟阶段由于酸的大量积累，大部分微生物在此阶段被严重抑制，甚至死亡，此时醋酸菌在物料中占绝对优势，物料中的酒精此时也消耗殆尽，酒化、醋化、糖化作用都基本停止，但各种风味物质酸、醇、酮、酚、酯、醛以及它们的复合物等 的转化还在缓慢地进行。2、 对于醋品的生产而言，不仅需要产酸能力极强的醋酸菌，也需要产酸及产香的芽孢杆菌以及一些其它的微生物，这也是各地出品的醋口感与香味不一的重要原因。但是，因为选用的分离培养基主要适用于产酸菌的分离，因而所分离出的菌株只是醋醅中微生物的一小部分。通常环境中可培养的细菌不到细菌总数的1%。而对于难以培养的细菌及一些需要特殊培养基的细菌，可以采用免培养法。3、醅料中的微生物前期以霉菌为主，中后期以酵母菌和细菌为主
