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1、胚胎移植技术应用于引进肉羊纯繁的报道我国是世界养羊生产第一大国，绵山羊饲养总数已达 3 亿只。但肉羊业起步较晚，无肉羊专用品种，绵羊个体产肉水平低、肉质差，在国际市场上缺乏竞争力。因此，利用引进优质肉羊品种，通过胚胎移植技术进行快速繁育，对于增强我国肉羊业的国际竞争能力、增加农民收入，促进肉羊产业化进程具有重大的战略意义。 2004 年 12 月，北美胚胎移植协会 Matin 等专家在长岭县的吉林中和牧业生物技术有限公司种羊场合作完成了一批纯种肉羊胚胎移植。现将本次胚胎移植情况做一论述。 1时间 2004 年 12 月至 2005 年 1 月 2地点 吉林省长岭县东六号乡吉林中和牧业生物技术有
2、限公司 3材料与器材、药品 3.1器材医用呼吸机、腹腔内窥镜、肠钳、尖头解剖剪、钝头解剖剪、止血钳、集卵器、 20ml 注射器、 100ml 注射器、胚胎移植手术架、电动剪毛器、手术刀片、医用缝合线、显微镜、冲胚管、培养皿、消毒卫生纸、医用喷壶 2 个、阴道栓。 3.2药品冲胚液（新西兰）、胚胎保存液（新西兰）、增效米先、肝素钠、前列烯醇、冰袋、阿托品、 FSH 、 PMSG 、生理盐水、麻醉剂（加拿大生产）、解麻醉剂（加拿大）、洗涤液、碘伏、酒精。 3.3供体羊萨福克（ suffolk ） 2 龄母羊 13 只，平均体重 140kg ，南非肉用美利奴羊（ South Afria mutton
3、 merino ） 2 龄母羊 26 只，平均体重 141kg ，杜泊（ doper ） 2 龄母羊 26 只，平均体重 138kg 。以上供体羊均于 2004 年 9 月从澳大利亚引入。 3.4受体羊东北细毛羊及杂类羊母羊共 500 只，体况良好，挑选其中体重较大、无生殖疾病的经产母羊 113 只进行同期发情处理。 4实验方法与内容 4.1前期准备 4.1.1供体羊补饲 供体羊手术前 2 个月强化饲养。日采食量： 1.5kg （干物质），营养方案如下： 羊草 ( 干 )65% ，苜蓿草 ( 干 )15% ，玉米 10% ，豆粕 5% ，磷酸钙 0.14% ，石灰石粉 0.12% ，余者为预混
4、料。预混料中各成分占饲料比重：硫酸钴 2.5mg/kg ，碘酸钾 0.9mg/kg ，硫酸铜 9mg/kg ，硫酸亚铁 87mg/kg ，硫酸锌 35mg/kg ，硫酸锰 40mg/kg ，氧化镁 100mg/kg ，亚硒酸钠 0.075mg/kg ，维生素 E12mg/kg ，维生素 A1700IU/kg 。 营养水平：粗蛋白约 8.71% ，钙 3.06g/kg ，磷 1.86g/kg ，代谢能约 8.92MJ/kg ，消化能约 10.87MJ/kg 。（注：本配方中羊草干物质粗蛋白以 3.6% 计，苜蓿草 ( 干 ) 以 20% ） 4.1.2受体羊补饲 日采食量 1.1 1.3kg ，
5、其它同上。 4.2超排与同期发情 供体羊埋植孕酮阴道栓 14 天，于埋栓的第 13 天进行连续 3 天 6 次 FSH 超排注射，间隔时间 12h ，于第 5 次注射 FSH 的同时撤掉孕酮阴道栓，注射氯前列烯醇 1ml ，第 15 16 天供体羊发情配种，第一次发情配种时注射促排 3 号。于发情后第 6 天进行手术（前列烯醇与 FSH 均为加拿大生产）。 受体羊与供体羊同期埋栓，撤栓后第 2 天发情供体羊配种。 4.3冲胚 4.3.1剪毛 供体羊空腹 24 小时，剪毛前肌注阿托品 1mg 。将羊腹部朝上保定，用电动剪毛器将腹部毛剪净，抬入手术室。 4.3.2麻醉、消毒 将供体羊保定，颈静脉注
6、射 ketalean5 15ml,7-12 秒后羊全身麻醉倒地，将羊头向后板与身体背部呈近似直角，把备好的经消毒的气管套管插入气管中，注意不要插入食道中，插好后抽出铜丝将气管套管露在口外部分用中空的塑料管系在头颈部固定，然后用 20ml 注射器将气管套管的小气囊充满气。迅速抬上可升降手术架，将四肢在手术架上保定好，先喷洗涤液，用消毒卫生纸擦拭，再喷碘伏擦拭，最后喷酒精擦拭，如此重复 2 次，将处理好的羊抬至手术无菌区，将气管套管与呼吸机相连。 4.3.3手术冲胚 采用子宫法。在乳房前腹中线（两条乳静脉之间）切开皮肤和皮下组织，钝性分离肌肉，最后打开腹膜，创口约 3cm 4cm 。盖上创巾，使切
7、口暴露于创巾中部。术者将食指和中指由切口伸入腹腔，在与骨盆交界的前后位置触摸子宫角，找到后用二指夹持，牵出创口外。创口要用被生理盐水浸湿的纱布围住，牵出的子宫角不与外皮接触，循子宫角至该侧输卵管找到卵巢，不可触摸，观察黄体和卵泡发育情况，冲胚或不冲胚直接缝合。 准备四支 20ml 冲胚液，在子宫角基部扎孔，将冲卵管插入，用注射器注入 4 8ml 气体使气囊充满气使之固定，另一端接集卵器。在子宫角的尖端插入套管针，连接吸有 20ml 温度在 37 的冲胚液，缓缓注入，使冲胚液流以子宫角后回流到集卵器，然后用 20ml 冲胚液重复冲洗 1 次；另一侧子宫角以同样方法冲洗。用集卵器集卵，留少量冲胚液
8、以便检胚。冲胚后将子宫角伤口作缝合处理，放回腹腔，倒入适量生理盐水及抗凝剂（ 39 ），然后对腹膜和外皮分别做缝合处理。4.3.4术后处理 将供体羊与呼吸机分离，推出手术室，肌注 Ventipulmin5ml ，用 20ml 针管将气管套管的小气囊空气抽出，然后慢慢抽出气管套管。然后肌注强效米先 1 支，使供体羊伏卧在地，过 3 8 分钟后，供体羊逐渐能站立，可人工辅助其站立，站立后可饲以少量优质牧草。 4.4检胚 所用的胚胎保存液产自新西兰。镜检冲胚液，在实物显微镜下区分没受精（ unfertilized ）卵及胚胎。将同一级的胚胎用吸管检出放入内有 10 15ml 胚胎保存液的培养皿，在盖
9、上写好级别标记，备用。 4.5移胚 4.5.1受体羊剪毛、消毒 同供体。 4.5.2麻醉同供体。 4.5.3腹腔内窥镜检查在距受体羊乳房前腹中线部 2cm 左右两侧各切开一个 2cm 左右的口，将腹腔内窥镜插入左侧，右侧插入肠钳，通过内窥镜观察卵巢表面黄体发育情况。 4.5.4移胚吸取胚胎方法是：用吸胚管吸入一段培养液，再吸一个小气泡，然后吸取胚胎，胚胎吸取后，再吸一个小气泡，最后吸一段培养液。然后进行移胚，左手持内窥镜观察腹腔内部，右手持肠钳将子宫角夹住牵引出腹腔外，在子宫角前 1/3 处用针头扎一个小孔，将胚胎慢慢注入。 4.5.5术后处理移胚后子宫角不必缝合，直接轻轻放回腹腔，缝合创口。
10、 4.6妊娠率及产羔情况 根据受体羊未返情情况，统计妊娠率为 87% 。 4 月 18 日有一只受体羊因脑包虫而死亡，解剖后子宫内双羔均发育良好。 6 月陆续产羔，产羔率 80% 左右。 4.7供体羊恢复情况 供体羊术后恢复良好，无发现有繁殖障碍的情况。 5实验结果统计 经统计，本次非繁殖季节胚胎移植平均每只供体羊平均冲出可用胚 4.8 枚，最高为 21 枚（南非肉用美利奴），每只受体羊移入胚胎 2 枚；妊娠率 87% ，总体达到国内领先水平。详见统计表。 胚胎移植统计数据总表： 合计数 萨福克（ Sufollk ） 南肉美 (SA.merino) 杜泊（ doper ） 检查供体羊数（只）：
11、 63 13 26 24 未受精羊数（只）： 20 1 15 4 怀孕羊数（只）： 4 1 1 2 没发情羊数（只）： 5 1 1 3 供体羊同期发情率： 90.5% 92.3% 96.5% 87.5% 合计实用供体羊数（只）： 39 11 10 18 合计可用胚胎数（枚）： 187 72 58 57 平均每只羊获可用胚胎数 ( 枚 ) ： 4.8 6.5 5.8 3.2 移入受体羊数： 99 35 32 32 检查受体羊数 113 受体羊同期发情率 87.7% 6讨论与分析 我国的胚胎移植技术日臻成熟，但在供体羊生殖系统操作损伤及妊娠率等方面与国际水平有一定差距，通过这次与国外专家的技术交流，我们发现了自身几点应当完善的地方。 6.1管理因素我国的胚胎移植技术往往仅注重技术操作、药物等层面，而国外把之当作一个系统来看，包括供受体羊选择、生殖系统检查、供受体羊前期强化饲养、操作的程序化等。 6.2操作的无菌化从器械消毒到操作的无菌化应控制十分严格。 6.3药物的高效及合理使用本次胚胎移植使用的大多为加拿大及新西兰 icpbio 公司生产的药物，药效稳定。
