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1、临床医学检验论文18篇临床医学检验论文:细菌检验临床医学论文一、基于菌落特征及生化和血清学的检测病灶细菌的分离培养一般分为以下几步进行：第一步是预增菌，即对细菌进行数量的扩增。第二步是选择性增菌，目的是提高目标菌的数量。第三步是对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认，并进行革兰氏染色观察细菌的形态；进行各种生化实验等作出初步地鉴定。不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。细菌可产生各种各样的酶，这些酶可以特异性地
2、分解相关底物，使培养基呈现出某种颜色或在紫外线下发出荧光，因而，我们只需在培养基内加入人工合成底物，根据菌落的颜色和荧光的情况即可知道是何种细菌。一般情况，人工合成底物由显色基团和细菌可代谢物质如糖苷类、氨基酸或肽类两部分组成，通常情况下底物为无色。在特异性酶作用下游离出产色基团并产生荧光或显示一定颜色，用紫外灯观察菌落产生的荧光或直接观察菌落颜色即可对菌种做出鉴定。二、基于抗原抗体结合的检测细菌的内部和表面含有大量的抗原决定簇，因此可以利用抗体抗原的结合原理利用抗体标记细菌，然后用标记酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)与抗体结合，酶催化的呈色反应可以间接反映细菌的种类和数量。目前，很多重要
3、的病原物均有相应的抗体，如抗HCV、抗HAV、梅毒抗体、抗HIV、优生优育TORCH系列等。该法具体程序为采用预先包被了的细菌单克隆抗体的微量塑料板，加入增菌液处理的样品，反应后再加入一定的指示剂，作用完毕后用酶标仪测定OD值来判定结果。因此，要得出可靠的结果，供试样品首先必须进行预增菌、选择性增菌，以便提高检出阳性率。此法除保留抗体、抗原反应的高度特异性外，由于标记酶的酶促反应的放大作用，使测定的灵敏度更高，检出细菌极限范围在105-106cfuml。三、基于遗传物质的鉴定1、聚合酶链式反应法聚合酶链式反应英文简称PCR，是近年应用较为广泛的分子生物学检测技术，尤其适用于培养困难或传统的血清
4、学方法不易检测的病原细菌。该法的原理是：地球上每种生物的遗传物质是不同的，聚合酶链式反应就是扩增生物中的特异性基因片段进而对生物进行鉴定的，例如沙门氏菌就有多个特异性基因，陈洪认为，编码细胞膜外膜含铁细胞受体的基因对沙门氏菌诊断有特异性；还有学者认为gyrA基因和rcsC基因之间的插入序列为伤寒沙门菌所特有，对伤寒有诊断意义，可以利用这些特异性的片段制作检测探针，目前，根据上述基因设计引物用于人体或自然界中细菌的检测，并形成了试剂盒作为商品销售。聚合酶链式反应需要的条件有引物、模板和四种脱氧核苷酸，反应过程包括高温变性、低温退火和延伸三个阶段，经25-30个循环，一个DNA分子就可扩增106以
5、上。该技术由于其具备快速、高度的特异性和敏感性，可不用进行细菌的培养等特点。2、扩增片段长度多态性方法扩增片段长度多态性简称AFLP，是目前广泛应用的DNA指纹技术之一，AFLP通过PCR扩增基因组限制性酶切片段并进行电泳分析。具体步骤是先用限制性内切酶切割基因组DNA，接头序列和相邻的限制性位点序列作为引物结合位点，然后将双链接头连接到DNA片段的末端，进行电泳呈现不同的谱带。由于AFLP可以使某一个体出现特定的DNA谱带，而在另一个体中可能无此谱带产生，因此，得到的DNA片段多态性可作为一种分子标记指纹，为研究细菌属乃至株间的亲缘关系提供了有效手段。AFLP结合了RFLP和PCR技术特点，
6、具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性，但该法不但成本较高，而且需要操作者具备较高的检验技术，目前一般医院尚难应用。四、16sRNA鉴定法不同原核生物的16srRNA古老且同源，既含有保守序列又有可变序列，保守性反映生物物种的亲缘关系，为系统发育提供线索；可变性则揭示生物物种的特征核酸序列，是种属鉴定的分子基础，其序列变化与进化距离相对应，在细菌种属分类鉴定中广泛应用。Edman等利用16srRNA技术将孢子病菌与其他38种真菌分子进化树进行比较，证实其为独立的一属。我国学者曾用16srRNA作探针，对来自贵州省不同地区、不同时间的209株伤寒菌进行核糖体分型(RT型)。结果显示，这些菌
7、株分属于26个RT型，以RTl和RT2型为优势，提示贵州地区伤寒存在众多的克隆群，这可能是贵州省伤寒多年来发病率一直居高的原因。核糖体分型技术虽然特异性较强，敏感性也较高，不需要特定的仪器，但操作较繁杂，需要较熟练的技术。五、小结法大多都需要特殊的仪器设备和具有操作水平熟练的专业技术人员，实验成本也较高，所以只在少数大医院使用，这些医院的实验设备好，人员素质高的中心实验室使用。这些技术对于细菌的许多遗传学和分类学等方面的问题能给予更确定的答案，并通过检测种属特异性基因来检测标本中病原体的存在与否，能自动快速地对样本进行检测鉴定。对于临床病原细菌的鉴定首先要涂片进行革兰氏染色镜检，可以根据染色反
8、应及形态特征，初步确定细菌的大致类型，对选择鉴定方法和合适的培养基具有指导意义。如正常无菌部位的标本通过染色镜检，只要检出细菌，即可诊断为感染类型，尽快为临床提供可靠的诊断依据。传统病原菌的分离鉴定较费时耗力，检测灵敏度差，虽然如此仍是临床医学细菌鉴定的主要途径，也是分子生物鉴定的基础条件。分子生物学技术不能显示微细菌的形态特征和生化特征等生存性以及是否存在感染的过程，反之，细菌的分离培养可以证实其生存性及细菌的形态特征和代谢产物等，同时病原细菌的分离培养是深入进行临床研究、药敏实验和流行病学的基础。临床医学检验论文:我国医院临床医学检验论文1血液分析进展血液分析是临床常用的检查方法，起初血液
9、细胞计数方法是电容或光学方法，但是这种测试技术受干扰因素较多，因此50年代Culter发明的阻抗法，使细胞的计数精密度提高35倍，避免了繁重的目力计数，同时阻抗法的灵敏度和精确度程度较高，相对便宜，所以血细胞计数方法迅速被阻抗方法所取代。1我国首次使用血液测定的仪器是在1959年，由北京医院引进瑞典生产的血细胞计数仪及血红蛋白仪。直到1961年，张根福通过对进口仪器的剖析，生产出我国第一台血细胞计数仪。2到目前为止，这种技术方兴未艾，但这种检测方法无法对细胞内部结构进行分析。由于计算机技术的不断发展，70年代早期的血小板计数仪不能将血小板与红细胞清晰分开，必须用富血小板血浆进行测定，但这种方法
10、十分繁琐，此后由于检测技术进一步提高和浮动界标技术的应用，可用全血进行血小板测定。80年代以来，激光法引入了血细胞分析系统。激光不但具有单色光、稳定等优点，而且能射入细胞的内部，检测核的形态和颗粒的情况，以此进行细胞分类。由于这些技术的应用,一些高档仪器已可做白细胞的五部分类，如库尔特公司的STKS和MAXA采用射频、电阻抗和激光技术，光电公司的激光法Celltacs8108K型，东亚公司的NE系列采用射频技术和电阻抗，SE-9000加用硫化氨基酸可检测幼粒细胞，亚培公司的CD-3500和CD-3000采用电阻抗与激光结合，拜尔公司的TechniconH系列采用化学反应与激光技术结合原理进行五
11、部分类测定。同时血液分析在八项分析的基础上，还可进行红细胞体积分布宽度、血小板平均体积、血小板压积和血小板体积分布宽度测定，并且可将各细胞的分布直方图打印出来，给贫血的类型及原因提供相关的信息。390年代设计生产了专用的网织红细胞计数仪。80年代Tanke等就用流式细胞仪进行网织红细胞计数，此方法提高了网织红细胞计数的精密度。由于流式细胞仪在临床实验室中很少使用，为此以拜尔为首的大公司设计了专门可进行网织红细胞计数的血液分析仪，方便了临床使用。由东亚公司设计生产的R-2000、R-3000网织红细胞仪还可根据网织红细胞的荧光强度，将其分成低、中、高荧光强度网织红细胞，其中幼稚网织红细胞显示强的
12、荧光，而成熟网织红细胞显示低的荧光。4全自动血液分析仪的生产,从标本混匀、吸样、稀释、分配、测定及打印结果,全部自动完成,不仅节省人力、减少繁琐劳动,且由于避免了手工吸样,大大增加了测定结果的精密度。在涂片方面，自我涂片染色制剂生产和设备的应用，消除涂片染色手工操作，每小时可制120涂片检查，以及血液分析仪根据血细胞比容，血液涂片自动调整，可得到最佳的血涂片。进入当代后，现代高端自动化系统全自动血液分析仪、网织红细胞分析仪系统，自动染色涂片，用条形码阅读器和条码识别，可以轻松地将分析功能试验室和全自动装配生产线结合在一起。使用仪器后可根据经营的指示将有用的信息，如样品的现状和涂片制备，在屏幕上
13、可以显示，如果需要可以打印出来。随着我国经济、科技的不断发展，在中国的临床血液检验分析，必将获得更大的发展。2血栓与止血实验诊断迅速在全国展开血栓与止血是新兴的一门学科，临床各科几乎无一不涉及血栓与止血问题，在发达国家，血栓与止血的检验已作为常规，广泛应用于临床，随着我国临床检验技术的进步，国内近几年也有较快的发展。近年来，生物化学，细胞生物学和血管内皮细胞形态的分子生物学对内皮细胞调节血栓与止血及血管内皮细胞粘附蛋白功能的研究，5揭示了血管内皮细胞在血栓与止血和动脉粥样硬化炎症的病理生理过程中起着重要作用。6对血小板功能（血小板糖蛋白和凝血功能，花生四烯酸，血小板活化因子，血小板代谢及调节功
14、能）的研究，有助于预防和治疗血栓形成，而且对新药物的开发具有重要价值的作用。7血液凝血反应是以麦克法兰的凝血级联理论为根本，但近年来修订和补充了很多内容。如多组分子作为一个单位来研究其辅助因子的蛋白酶凝血反应，澄清了许多复杂酶的结构和功能，更新了观念。另一个积极的反应是凝血蛋白酶激活反馈，例如加速和扩大在反应的凝血和负反馈调节作用、活化凝血的作用，更深刻地揭示凝固行为。8经典的内源性和外源性凝血之间的内在联系通路的激活不断发现，并不能简单地理解为凝血机制外源性和内源性的两种系统。止血与血栓实验质控在我国刚刚起步，有作者对分析前质量控制进行了系统的研究，探讨了各种因子在不同条件下的稳定性。凝血因
15、子最不稳定，在32保存24小时，因子活性只为原活性的5，活性丧失了95，在4保存24小时，因子活性只为原活性的30，活性丧失了70。最稳定的凝血因子为因子，在32保存24小时，活性无任何变化。蛋白C分别在-20、4、20、32保存24小时，其活性分别为原活性的87、80、56和42。而纤溶酶原则随保存温度的增高和时间延长纤溶活性增加。这些资料对于质量控制方法的建立提供了重要的依据。3流式细胞术在我国的发展和临床应用1969年VanDilla及其同事在LosAlamos,NM发明第一台荧光检测细胞计，随后1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂，促进了流式细胞术的发展。流式细胞术是一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。9其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。10根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。我国在80年代初引进了第一台流式细胞仪。随着科技的不断进步，各种性能完善、操作简便的流式细胞仪相继问世，而新的荧光试剂不断发现使检测费用日益降低，从而使流式细胞术逐步运用于临床，成为常规实验诊断的重要手段，使临床诊
