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1、实验报告五(2015.5.27)荧光显微镜检测细胞凋亡(Hoechst 33258染色) 姓名：王亚斌 班级：生物技术12 (1)学号：2012332860026成绩优秀良好中等及格不及格实验五：荧光显微镜检测细胞凋亡(Hoechst 33258染色)一实验目的：1 了解荧光显微镜的构造并且学会使用荧光显微镜；2通过荧光显微镜学会分析数据图片。二实验原理：Hoechst 33258,分子式为C25H24N6O 3HC1,分子量为533.88,水溶解度可达10mg/ml。 Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 为特异性DNA染
2、料，与A-T键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即 染色。而活细胞的着色是渐进性的，在10min内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈 弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。三实验器材：1ml移液枪及枪头，荧光显微镜，培养贴壁细胞，PBS缓冲液，Hoechst 33258染色液 六孔板，培养箱四实验步骤和方法：1：加入适当量Hoechst 33258染色液，注意必须充分覆盖住待染色样品。通常六孔板 加1ml/孔，96孔板加100“1/孔。2：放入37 C培养箱中培养30min。3：小心吸去染色液，用1ml PBS洗涤2-3次。4 :置于荧光
3、显微镜下，选用340nm的激发光观察：在荧光显微镜下，活细胞呈弥散 均匀荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。如果见到3个或3个以上 的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。五实验结果碱浓度为2uM林碱浓度为4uM防己诺林碱浓度为6uM防己诺林碱浓度为8uM防己诺林碱浓度为10uM在上图可以看出，在防己诺林碱浓度为2um/ml的时候出现了染致密的颗粒块状荧光，也就 是说在这个浓度下，细胞开始放生了凋亡，而且，在不断提高防己诺林碱浓度的情况下，视 野里的凋亡细胞开始变多了，而且凋亡细胞数目要多于活细胞数目。六分析与讨论在荧光显微镜下，用340nm的激发光观察活细胞呈弥散均匀荧光，凋亡细胞核或细胞 质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋 亡细胞，图中，随着防己诺林碱浓度的升高，凋亡细胞数目逐渐增多，当浓度在10um/ml 的时候，视野中几乎看不到有活细胞的存在，可以说，在这个浓度下，抑制细胞数目增殖的 作用是最强的。
