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1、 毕业论文加减三黄汤对感染大肠杆菌鼠的转化生长因子-、IL-1的影响The Effects of Transforming Growth Factor-and IL-1on Resistance E.coli from Mice by Modified Three Yellow Soups姓 名： 指导教师： 院 系：动物科技学院动物医学系专 业：动植物检疫年 级：2007级论文提交时间：2011年6月9日2目录引 言31 材料与方法41.1 材料41.1.1 试验药品 41.1.2 试验菌株 41.1.3 仪器设备41.1.4 试验动物 41.1.5试剂 41.2 方法41.2.1 试验菌液
2、的制备 41.2. 2 抑制剂配方的制定及提取物的制备 51.2. 3 最小抑菌浓度的测定 采用试管两倍稀释法，对所制备的中药MTYS提取物51.2. 4 药物敏感性的测定51.2.5 中药抑制剂与耐药性大肠杆菌使用量的确立51.2.6 分组与模型制作 61.2.7 相应测定体重变化脾、肝免疫指数 61.2.8 血液采集与血清制备61.2.9组织匀浆制备，血清及组织匀浆因子检测转化生长因子试剂盒检测免疫力 61.2.10 统计结果，确定中药组方疗效 82 结果82.1组菌的抑菌作用方中药对耐药性大肠杆菌 82.2 中药抑制剂在机体中最佳使用剂量82.3 耐药大肠杆菌最佳攻毒量82.4 实验期间
3、各组死亡情况与疗效结果82.5各组肝指数和脾指数的测定结果92.6中药抑制剂对感染大肠杆菌鼠的某些生化指标影响92.6.1肝功能方面9表3 中药抑制剂对感染大肠杆菌鼠的某些生化指标影响102.6.2 肾脏功能112.6.3 免疫 112.6.4血淀粉酶（HD）112.7 血清及组织细胞因子检测112.7.1 转化生长因子对小白鼠免疫功能的影响112.6.2白介素1-对鼠免疫功能的影响123讨论123.1 组方中药的抑菌作用123.2促进机体免疫器官的发育，提高机体免疫力123.3 保肝利胆，保肾排毒133.4血清及组织细胞因子检测144结论14参考文献15致谢172加减三黄汤对感染大肠杆菌鼠的
4、转化生长因子-、IL-1的影响 摘要：目的：讨探加减三黄汤对多重耐药人源性大肠杆菌的影响感染鼠的免疫指标的影响。方法：确定加减三黄汤（2g/ml）对致病性高度耐药的人源大肠杆菌2952(O142+O26+O13)的接种量以原液的0.5ml（2.4109CFU）。选取健康的30日龄小鼠30只，随机分为健康组，阳性对照组和攻毒治疗组。自感染试验菌第1天起，试验组每只小鼠每天分别灌服中药制剂提取物0.5ml，连续7d。在感染后第8d，随机抽取测定生化指标，剖检测定免疫器官指数，血清及转化生长因子-、IL-1因子的含量。结果：加减三黄汤对人工感染耐药E.coli后小鼠生化指标有显著的影响，能够促进机体
5、免疫器官的发育，提高机体免疫力；能显著降低血清中ALT、AST、GLU的含量，具有保肝利胆作用；IgG、IgA和IgM的提高、恢复，不同程度的增加了免疫力。可以显著提高血清及转化生长因子-、IL-1因子的含量影响肝脾的恢复。结论：加减三黄汤对人源多重耐药性大肠杆菌能起到一定的耐药逆转作用，对动物机体具有一定的免疫保护作用。关键词：人源耐药性大肠杆菌 转化生长因子- IL-1The Effects of Transforming Growth Factor-and IL-1on Resistance E.coli from Mice by Modified Three Yellow Soups
6、Abstract:Objective: Please agent MTYS Soups (Modified Three Yellow Multidrug) on the influence of Resistance of e. Coli infected mice immune index effects. Methods：the 2g/ml inoculum of multiple drug resistance to2952 E. coli was determined and inoculated by 0.5ml (2.4 109CFU) In vivo test. The30 30
7、-day-olds mice fowl were randomly arranged into 3 groups, the positive control and experiment group were inoculated with the 0.5ml extractive of MTYS each day for seven days. After the eight days, some mice fowl were randomly taken from each group for detecting blood serum biochemical indicator , im
8、mune organ index and the content of Serum and organization of cytokines IL -1, transforming growth factor-(TGF-). Results: MTYS had very obviously effect on biochemical indicator on mice fowl which were artifical infected resistant E.coli. It could promote growth of the immune organs(thymus and burs
9、a of Fabricius) and immunity in silky fowl; reduce obviously the contents of ALT、AST and GLU in blood-serum; protect liver and choleretic effect; IgG, IgA and IgM improvement, rehabilitation, varying degrees of increase in immunity. cytokines IL-1and transforming growth factor-; content were increas
10、e significantly of serum and tissue factor, then effect the recovery of the liver and spleen. Conclusions: MTYS had obviously inhibitory effect to resistant multidrug E.coli and immunoprotection on creature.Key words: the resistant E.coli isolated from human IL-1 TGF-引 言大肠杆菌是畜禽和人类的重要致病菌，对畜牧业生产和人类健康都
11、有着严重的影响。在临床防治过程中，随着抗生素等抗菌药物的大量使用，大肠杆菌耐药菌株也在不断出新，耐药谱也在不断扩大，有的菌株甚至对临床上刚研制的新型抗生素也表现出极强的耐药 1，在养殖业和食品卫生中形成了严重的恶性循环。随着大肠杆菌耐药株的不断增多，大肠杆菌感染及其食品污染有不断上升的趋势，尤其是人类食物中毒和胃肠炎的不断暴发已成为全球关注的焦点，因此，控制耐药菌的传播和防治细菌感染己成为一个世界性难题。虽然人们不断开发出新的抗菌谱更广的药物，如头孢类、新喹诺酮类药物，在临床上也有非常理想的报道，但在若干年后仍然可能变得毫无用处。据报道2-3，经常食用含药物残留的动物性食品，动物体内的耐药菌株
12、可通过动物性食品来传播给人类，给人类治疗疾病带来困难，特别是耐药性大肠杆菌的感染往往可以延误疾病的正常治疗。目前对多重耐药性大肠杆菌抑制剂的研究已有很多报道，但对抗耐药性大肠杆菌中药抑制剂的研究报道较少。我国有着得天独厚的中药资源，中药在治疗感染方面显示了独特的作用，同时中药具有资源丰富、作用靶位多、毒副作用较小、价格便宜及体内使用安全等优点。中草药的活性成分可抑制耐药性大肠杆菌主动外输系统，使耐药性大肠杆菌消除其耐药性4-5。本实验先通过在体外对人源大肠杆菌进行临床分离细菌鉴定、分离培养、血清型鉴定和耐药性检测，然后再将分离鉴定的菌株回归到动物体内，对鼠的免疫力和某些免疫因子进行检测，获取有
13、效组方应用于临床，可为该病今后防治提供一定依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试验药品 黄连、厚朴、苦参、大青叶、穿心莲、黄芩、黄柏、木香、甘草、黄芪、茯苓、均购自张家口医药公司。营养肉汤 北京海淀区微生物培养基制品厂生产麦糠凯琼脂 北京陆桥技术有限责任公司生产1.1.2 试验菌株 经临床分离5-6生化鉴定的人源大肠杆菌进行血清型鉴定，获得致病性高度耐药的人源2952(O142+O26+O13)大肠杆菌7。（北京天坛生物制品检定所鉴定，本室保存）。1.1.3 仪器设备 旋转蒸发器、LDZX-40B1型不锈钢立式自动电热蒸汽压力灭菌器、SZX-01型超静工作台、SKP-01型电热恒温培养
14、箱、电子天平、微量加样器、旋爱林牌WZRX1微量吸液器(苏州市东吴医用电子仪器厂)、Cap-Ria 16 GAMMA COUNTER （美国产）、FT-614混匀器(核工业部北京和仪器厂）、HH-W21-420BS电热很温水浴箱（上海跃进医用光学器械厂）、541-10000-00-0 HEIDOLPH 振荡器 REAX top Glasblasreei-Krankenhausbedarf laboreinrichtungen. Hassa Laborbedarf 1.1.4 试验动物 30只30日龄小鼠 购自河北北方学院附属实验牧场1.1.5试剂 碘125I白细胞介素1放射免疫分析药盒，北京普
15、尔伟业生物科技有限公司；碘125I转化生长因子-放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司。1.2 方法1.2.1 试验菌液的制备 将分离并筛选2952(O142+O26+O13)菌株8进行复苏培养18h24h。在无菌操条件下，吸取20ul菌液，接种于含2.0ml营养肉汤培养基试管中，按10-1、10-2、10-3、，十进位稀释，置37培养。每种菌株做两个重复。采用显微镜直接计数法进行活菌计数，配成约含菌量为109CFU/ml的菌悬液。1.2. 2 抑制剂配方的制定及提取物的制备 根据传统中药理论和配伍原则及三黄汤配方进行加减，制成如下配方：中药制剂（MTYS）黄芩12g、黄连12g、黄柏12g、穿心莲9g、苦参9g、金银花15g、大青叶15g、木香6g、甘草9g、厚朴9g、黄芪9g、茯苓9g。1.2. 3 最小抑菌浓度（MIC）的测定 采用试管两倍稀释法，对所制备的中药MTYS提取物需先测定其对2952(O142+O26+O13)菌株的MIC值，细菌接
