《保健食品中超氧化物歧化酶活性的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《保健食品中超氧化物歧化酶活性的测定（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定（本法参照 GB/T5009 171-2003）一、原理将25C时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。 在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力 测定SOD活力。二、试剂1、A液：PH8.20 O.lmol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸缓冲液（内含 lmmol/LEDTA Na）。称取 1.2114g三羟甲基氨基甲烷（Tris）和 37.2mgEDTA Na 溶于62.4ml 0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至100mL。2、B液：4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚5
2、6.7mg溶于少量 10mmol/l盐酸溶液，并定容至100mL。3、盐酸溶液：10mmol/L4、超氧化物歧化酶：0.200mg/mL5、蒸馏水：二重石英蒸馏水。三、仪器1、紫外-可见分光光度计；2、精密酸度计,0.01PH；3、离心机;4、10mL比色管；5、10mL离心管；6、玻璃乳钵。四、测定步骤1、取茶叶样品1.00g置于研钵中，加入9.0mL蒸馏水研磨5分钟，移入10mL 离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经 4000r/min 离心 15 分钟，取上清液测定。（澄清液体样品可取原液直接测定，浑 浊液体样品经4000r/min离心15min,再取上清液
3、测定。）2、在25C左右，于10mL比色管中依次加入A液2.35mL，蒸馏水2.00mL,B液0.15mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和lmin后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率 A325（min-i）为0.060。3、SOD活性测定加样程序（表1）试液空白样液SOD液A 液/mL2.352.352.35蒸馏水/mL2.001.801.80样液或SOD液/yL-20.020.0B 液/mL0.150.150.15五、结果1、结果计算液体样品按式（1）计算:nA - A325325 X 100%x 4.5 x x DVASOD 活力（U/mL）=32
4、550%式中：U/mLSOD酶活力单位； A325邻苯三酚自氧化速率；A，325样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率；D样液或酶液的稀释倍数；V所加酶液或样液体积，mLo计算结果保留三位有效数字。2、固体样品按式（2）计算：nA - A32325 X 100%vSOD 活力（U/g）=325x 4.5 x x 4（2）50%V m丿式中：V加入样液或酶液的体积，mL；a325一邻苯三酚自氧化速率；A 325样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率;D样液或酶液的稀释倍数；V样液总体积，mL； 4.5反应液总体积， mL； m样液的质量，mL。 计算结果保留三位有效数字3、精密度在重复性条件下的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
