ITP腹腔镜术前后T淋巴细胞亚群变化与疗效分析

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1、ITP 腹腔镜术前后 T 淋巴细胞亚群变化与疗效分析摘要 目的： 研究分析特发性免疫性血小板减少性紫癜(Immune thrombocytopenicpurpura,ITP)患者腹腔镜前后外周血中血小板相关抗体及T淋巴细胞亚群的变化情况，并 探讨其与手术疗效的相关性及临床意义。方法：抽取 2013 年 5 月至 2014 年 5 月我院 ITP 行腹腔镜术的患者 87 例作为研究对象，按照手术前后分别予所有患者以治疗前组与治疗后 组命名。另抽取30例健康志愿者作为对照组。检测分析各组的血小板相关抗体及T淋巴细 胞亚群的变化情况。结果：治疗前组的PAIgA、PAIgG、PAIgM水平显著高于治疗

2、后组与对照 组，治疗前组CD3+、CDD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD16+56+的百分比则均低于治疗后 组及对照组，而治疗前组CD3+CD8+、CD19+百分比其余两组。治疗后组与对照组的相关抗体 水平、各项淋巴细胞亚群百分比相比，均有P0.05，无统计学意义。结论：体液免疫及细 胞免疫异常为ITP发病重要因素，腹腔镜前后T淋巴细胞亚群的改变可反映该病的病例过程， T淋巴细胞亚群联合相关抗体检测对了解ITP的发病情况，判断其疗效及预后有重要意义。关键词特发性免疫性血小板减少性紫癜；T淋巴细胞亚群；血小板相关抗体；流式细胞术特发性免疫性血小板减少性紫瘢(ITP)又名原发

3、性血小板减少紫瘢，指无明显诱因下 血小板减少症，为临床上常见血液病。其主要表现为血小板寿命缩短、数量减少及骨髓巨核 细胞增多。研究表明，ITP与交叉反应所引起的体液免疫和细胞免疫异常有关，尤其T淋巴 细胞亚群、 B 淋巴细胞的变化与 ITP 的发病、治疗效果密切相关。而脾脏则是破坏血小板的 主要场所，脾切除则可减少免疫系统异常，减少抗体的产生，迅速升高血小板含量，为治疗 激素无效性 ITP 的主要方式。为了进一步探究 ITP 的发生机制，向临床提供更有效的治疗方 式，本研究通过对 ITP 患者的外周血小板抗体及 T 淋巴细胞亚群的变化情况进行分析，现总 结报道如下： 1资料与方法1.1 临床资

4、料抽取 2013 年 5 月至 2014 年 5 月我院腹腔镜脾切除术成功的 ITP 患者 87 例作为研究对 象，按照手术前后分别予所有患者以治疗前组与治疗后组命名。另抽取36 例健康志愿者作 为对照组。 87 例患者中男 46 例，女 41 例，年龄 9-68 岁，平均(30.312.4)岁。病程 6-25 天，平均(3.51.1)天。患者皮肤和黏膜出血情况各异，其中牙龈出血10 例，肺出血 2 例，便血5例，鼻出血19例。所有患者诊断结构均符合血小板计数V100X109，排除继发 性血小板减少性疾病。健康志愿者中男 21 例，女 15 例，年龄 12-66 岁，平均(32.711.9)

5、岁。1.2试剂及仪器 流式细胞仪：型号 BD FACSCALIBUR , BD Bioscience(U.S.A.) 低速离心机：型号TDZ6B,上海卢湘仪器有限公司 螺旋振荡器：型号 ZX21， TY10 美国 Stovall 主要试剂： Goat F(ab)2IgG-FITC/ Goat F(ab)2Anti-HumanIgA/ GoatF(ab ) 2Anti-HumanlgG/ Goat F(ab ) 2Ant i-HumanlgM ;单克隆三色抗体CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC51.2 方法：1.2.1 标本采集空腹状态，无菌操作下一次性采集受试者外周静脉血4ml,以E

6、DTA抗凝后分开各2ml置于两根试管中，迅速送至流式细胞室。1.2.2流式细胞术检测外周血血小板相关抗体试剂配置，检查样本是否凝血；取各受试者抗凝全血1ml,低速离心，洗涤血小板 后 以 CD41-PE 进 行 荧 光 标 记 ； 分 别 以 Goat F(ab )2IgG-FITC/ GoatF(ab ) 2Anti-HumanlgA/ Goat F(ab ) 2Anti-HumanlgG/ Goat F(ab ) 2Anti-HumanlgM 进行 单克隆抗体标记，洗涤后待上机检测；调试流式细胞仪，检测样本中1000个细胞，读取 记录 PAIgG、PAIgA、PAIgM 平均值。1.2.3

7、流式细胞术检测T淋巴细胞亚群取各受试者抗凝全血100l,以CD41-PE进行荧光标记；分别以单克隆三色抗体 CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5对血小板进行标记；洗涤后上机待测；调试流式细胞仪，以 血小板设门，检测细胞 1000 个，读取记录 CD3+、CDD3+CD4+、CD16+56+、CD3+CD8+、CD19+ 亚群的百分数。1.3 统计学处理对文中所得数据进行统计学处理，采用SPSS15.0软件进行分析，计量资料采用t检验，计数资料采用X 2检验，PV0.05为有统计学意义。2 结果：2.1 各组外周血小板相关抗体水平比较检测分析三组受试者的血小板及外周血小板相关抗体如表-

8、1，表中显示治疗前组的PLT 计数明显小于治疗后组与对照组。治疗前组的PAIgA、PAIgG、PAIgM水平显著高于治疗后组 与对照组，而治疗后组与对照组的相关抗体水平相比，均有P0.05，无统计学意义。表-1 三组血小板及外周血小板相关抗体水平检测组别PLTPAIgGPAIgAPAIgM治疗前组（ n=87）82.122.88.662.9116.035.826.333.12治疗后组（ n=87）143.534.8*1.560.99*1.730.44*1.650.62*对照组（n=36）172.660.9*1.430.79*1.620.43*1.680.54*注：*表示与治疗前相比，差异具有统

9、计学意义，PV0.05.2.2 各组 T 细胞亚群水平的比较统计分析各组 T 细胞亚群水平如表 -2. 表中显示治疗前组的 CD3+、CDD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD16+56+的百分比均低于治疗后组及对照组，而治疗后组与对照组的 各项指标比较，均有P0.05，无统计学意义。表-2各组T细胞亚群水平变化（）组别CD3+CDD3+CD4+CD3+CD4+/CD3+CD8+CD16+56+治疗前组58. 1112.5729.687.510.780.349.024.98（ n=87）治疗后组66.4311.32*43.127.87*1.540.71*16.227.86*（

10、 n=87）对照组（n=36）70.8810.21*38.73 8.54*1.56 0.64*16.227.86*注：*表示与治疗前相比，差异具有统计学意义，PV0.05.2.3 各组 T 细胞亚群水平变化比较各组受试者的CD3+CD8+、CD19+的百分比如表-3，表中显示治疗前组CD3+CD8+、 CD19+百分比均大于治疗后组与对照组。而治疗后组与对照组各项指标相比，均有P0.05, 无统计学意义。表-3 各组 T 细胞亚群水平变化 （ %）组别CD3+CD8+CD19+治疗前组（n=87）39.01土 8.2625.190.56治疗后组（n=87）29.92 7.32*14.076.2

11、5*对照组（n=36）25.33 5.82*12.085.62*注：*表示与治疗前相比，差异具有统计学意义，PV0.05.3讨论ITP 可分为特发性与继发性免疫性血小板减少性紫癜，继发性免疫性血小板减少性紫癜 可由药物诱导、免疫功能缺陷等引起。特发性免疫性血小板减少性紫癜在临床上常无明显诱 因，其诊断常为排除性诊断。ITP发病多见于儿童，无性别差异，其通过短期激素治疗可自 行痊愈，而部分患者则发展为慢性ITP。对于药物治疗无效的患者，临床上常采用脾切除术 进行治疗，脾切除可干预PLT的损伤机制，明显改善PLT的不断恶化减少，为治疗ITP的有 效方式。ITP的发病机制及病因的探索在ITP的治疗中

12、起到举足轻重的作用。随着医学的不断进 步，医学界对ITP的发病机制及病因的研究水平得到进一步提高。研究表明，体液免疫异常 为 ITP 发病重要因素。单核-巨噬细胞通过识别血小板表面特异性抗原以刺激淋巴细胞产生 相应抗血小板抗体，从而介导血小板的损伤、血小板产生减少及骨髓巨核细胞结构功能异常。 血小板表面抗原分为血小板相关抗原与血小板特异性抗原，血小板相关抗原与其他组织细胞 共有，无特异性，而血小板特异性抗原则为血小板表面特异性糖蛋白。经抗原诱导，体内B 细胞突变并增值克隆，导致大量抗血小板糖蛋白抗体产生，从而介导血小板的死亡。本研究 显示治疗前组的PAIgA、PAIgG、PAIgM水平显著高于

13、治疗后组与对照组，可见ITP患者体液 免疫亢进，相关抗体大量产生。由上述可知，ITP 患者外周血中 CD3+、CDD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD16+56+百分 比异常减少，而CD3+CD8+、CD19+百分比则显著增高，可见细胞免疫亦为ITP的发病另一重 要因素。研究表明，CD4+T细胞表面GPIIb/IIIa受体暴露可刺激B细胞产生抗血小板抗体。 其中CD4+细胞可促进体液及细胞免疫,而CD8+细胞则可抑制免疫系统，本研究中CD3+CD4+/ CD3+CD8+比值的降低提示存在免疫功能损伤，其与血小板异常抗体的产生密切相关。同时， ITP患者手术前NK细胞百分数显

14、著低于手术后，正常情况下NK细胞可抑制B细胞的异常增 殖,调节免疫功能，而NK细胞的减少提示ITP患者可通过降低NK细胞比例以活化B细胞而 产生过强的免疫反应。脾脏为人体最大的外周淋巴器官，对体液免疫与细胞免疫起到决定性的作用。脾脏可调 节外周淋巴细胞，为CTL的主要储存场所。而淋巴细胞亚群分化异常使CTL百分比增高，进 而介导 PLT 的损伤破坏。本研究表明脾切除术前后患者的 T 淋巴细胞亚群差异显著，尤其 CD3+及CTL百分比的下降提示脾切除可减少CTL百分比，进而减少PLT的损伤。上述可知手 术后大部分患者的PLT高于手术前，即使PLT计数升高不明显，患者自诉出血症状亦在一定 程度上减

15、轻。综上所述，体液免疫及细胞免疫异常为ITP发病重要因素，腹腔镜前后T淋巴细胞亚群的 改变可反映该病的病理过程，且可联合相关抗体检测用于ITP的诊断及疗效评估。因此，T淋巴细胞亚群水平的检测对了解ITP的发病情况，判断其疗效及预后具有重要的意义。参考文献1 .赵海丰，张翼鷟.CD4+CD25+调节性T细胞在免疫性血小板减少症发病中的研究进展J. 天津医药. 2014 (04):390-2.2 .Ma L， Zhou Z， Wang H， Zhou H， Zhang D， Li H， et al. Increased expressions of DNA methyltransferases contribute to CD70 promoter hypomethylation and over expression of CD70 in ITPJ. Molecular Immunology. 2011,48(12 - 13):1525-31.3 .赵海丰，张翼鷟.CD4+CD25+调节性T细胞在免疫性血小板减少症发病中的研究进展J. 天津医药. 2014 (