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1、蛋白质沉淀浓缩方法 - 教育文库 TCA-DOC 沉淀的蛋白质含量非常低 1)一个卷的蛋白质溶液,添加2%的1/100 vol. DOC(Na脱氧胆酸盐、洗涤剂)。 2)漩涡,让坐30分钟在4摄氏度。 3)添加1/10的三氯乙酸(TCA)100%的漩涡,让坐在在4摄氏度(制备100%柠檬酸:454毫升水柠檬酸/公斤。保持在黑暗bottleat 4摄氏度。小心,使用手套! ! !) 正常的柠檬酸 消除TCA可溶性干扰和蛋白质浓度 1)样本的蛋白质溶液添加三氯乙酸(TCA)100% 13%最终浓度。混合和保持5分钟-20 oc然后15分钟4摄氏度,或长时间在4摄氏度-20 oc一步降低蛋白质浓度。
2、建议:如果走蛋白质浓度很低。 丙酮沉淀 消除丙酮可溶干扰和蛋白质浓度 1)增加1卷的蛋白质溶液4卷冷丙酮。混合和保持至少20分钟-20 oc。(建议:如果蛋白质浓度很低)。 乙醇沉淀 有用的方法将蛋白质和去除盐酸胍PAGE-SDS之前 1)增加1卷的蛋白质溶液9卷冷乙醇100%。混合和保持至少10分钟。在-20 oc。(建议:离开)。 2)在微型离心机旋转15分钟4摄氏度最大速度(15000克)。仔细放电浮在表面的颗粒和保留:干燥管通过反演薄纸(颗粒可能很难看到)。 3)用90%冷乙醇清洗颗粒(保持在-20 oc)。全速涡和repellet样本5分钟。 8。以4摄氏度10分钟在微型离心机旋转速
3、度最大。 酸化丙酮/甲醇 6)(一些柠檬酸的存在可以给一个黄色的颜色由于样本的酸化缓冲;滴定1 n氢氧化钠或1 m TrisHCl pH8.5获得正常的蓝色样品缓冲颜色。) 皮尔斯:# 26800页prepTM清理和蛋白质浓缩设备(pdf) 氯仿甲醇沉淀 有用的方法去除盐和洗涤剂 1)样本的体积100 ul 2)增加400 ul甲醇 3)涡 4)增加100 ul氯仿 5)涡 6)增加300 ul H2O 7)涡 皮尔斯:# 26800页prepTM清理和蛋白质浓缩设备(pdf) 氯仿甲醇沉淀 有用的方法去除盐和洗涤剂 1)样本的体积100 ul 2)增加400 ul甲醇 3)涡 4)增加100 ul氯仿 5)涡 6)增加300 ul H2O 7)涡 第 页 共 页
