临床微生物培养基手册大全临床微生物检验 常用基础培养基★营养琼脂【用途】供作一般细菌培养和菌株的纯化及传种用【原理】培养基含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖【成分】蛋白胨１０牛肉膏５.０氯化钠５.０琼脂粉２０蒸馏水１ＬpＨ７.2～7.4【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后假如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121℃灭菌15min,倾注平板或制成斜面,置冰箱保存,两周内保持用完【接种】根据用途不同按常规操作,35℃18～24h观察结果【观察结果】在平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为a溶血溶血的情况可以显微镜下用低【质量控制】金黄色葡萄球菌,菌落浅黄色,直径＞1.5mm志贺痢疾菌,菌落无色,直径＞1.5mm铜绿假单胞菌,菌落无色或浅绿色,直径＞2.5mm★血琼脂培养基【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长，一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质在45℃～50℃的基础培养基中加加入血液（5～10%）可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。
若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经35℃18～24h后色泽仍然鲜艳在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血菌落周围呈绿色为ɑ溶血溶血的情况可以显微镜下用低倍镜观察【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60ml pＨ７.2～7.4【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，置三角瓶内，高压灭菌（121℃15min）后冷至约50℃ ，加入无菌纤维羊血，旋转式充分摇匀后倾平板血琼脂层厚4mm凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无菌生长，冷藏备用接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35℃培养1～2d，观察结果【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为ɑ【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好，ß-溶血肺炎链球菌，ATCC6303，为ɑ溶血表皮葡萄球菌，ATCC12228，生长良好，不溶血★巧克力培养基【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至80～90℃时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。
凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔血100mlpH７.2～7.4【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，高压灭菌（121℃15min）后在80～90℃以无菌方法加入血液，摇匀后置90℃水浴中维持该温度15min，使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50℃，倾制平板 凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无细菌生长，冷藏备用接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35℃普通培养或置含5%～10%二氧化碳环境培养18～24h，取出观察细菌生长状况观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211，生长良好，菌落典型肺炎链球菌，ATCC6305，生长良好，菌落典型保存】置冰箱，1周内用完★营养肉汤【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。
成分】牛肉浸液1L蛋白胨10氯化钠5pH7.2～7.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸馏水代替）【制备】上述各成分混合溶解，校正pH分装试管，每管3～5ml高压灭菌（121℃15min），做无菌试验后冷藏备用质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好★肉浸液培养基【用途】供作基础培养用营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过水解并用Nacl【成分】新鲜牛肉500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.4～7.6【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎(或用刀剁碎)取500g碎肉，加蒸馏水1L，混合后置冰箱中冷浸过夜2.将肉浸液取出，煮沸20～30min（并不断搅拌，以免沉底、烧焦）冷后，用绒布或麻布挤压过滤，使所有的肉浸汁尽量挤出3.加入蛋白胨、氯化钠，加热溶解，补足蒸发的水分矫正Ph至7.4～7.64.用滤纸过滤，装瓶高压灭菌（121℃15min）即成肉浸液5.与1L肉浸液中加入2～3g琼脂，即成肉浸液琼脂使用】根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其他培养基如制作固体培养基，加入琼脂1.5～2%即成。
质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好保存】置冰箱可使用较长时间★牛脑心浸液培养基【用途】用于培养要求较高的细菌原理】牛心脑浸液是细菌生长的营养物质，磷酸盐为缓冲剂，加上适宜的无机盐，有利于细菌的生长繁殖成分】牛脑（小牛脑制成浸液）200牛心（制成浸液）250眎胨或多胨10葡萄糖2Na2HPO4蒸馏水1L制备】1.将牛脑、牛心制成浸液，并加水至1L，加入固体成分，加温溶解2.调整pH为7.6，分装，高压灭菌（121℃15min）3.牛脑心浸液中加放1.5～2%琼脂，即为牛脑心浸液琼脂临床经验】1.培养厌氧菌时再加入半胱氨酸0.5g2.若在此培养基中再加入酵母浸出物5g/1L，则效果更佳★肝浸液及肝浸液琼脂【用途】使用于对营养要求较高的细菌培养原理】肝组织除了含有丰富的营养成分，如蛋白质、碳水化合物以及无机盐外，还含有胆固醇、铁化合物、血红蛋白等细菌生长因子，有利于各种细菌的生长繁殖成分】牛肝或猪肝500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.0【制备】将新鲜的牛或猪肝洗净，除去脂肪、浆膜、大血管、肝胆总管，绞碎，置铝制容器内，加蒸馏水500ml，经流动蒸汽加热30min，取出调匀后，再蒸90min。
然后，用数层纱布或绒布过滤滤液中加入蛋白胨、氯化钠，并加蒸馏水至1L加热溶解，矫正pH至7.0，再置于流动蒸汽蒸30min用滤纸过滤，分装经高压灭菌（121℃15min），即成肝浸液于每100ml肝浸液中加入2～3g琼脂，即成肝浸液琼脂保存】置冰箱内有效期较长★蛋白胨水【用途】1.供细菌靛基质（吲哚）试验用2.一般细菌培养和传代【原理】培养基中的蛋白胨含有色氨酸，能被有些细菌利用而成靛基质，与试剂对二甲氨基苯醛缩二吲哚而不利用色氨酸的细菌则无此反应，故可鉴别细菌因含有胨和氯化钠，故可供一般培养和传代成分】蛋白胨（或胰蛋白胨）10氯化钠5蒸馏水1LpH7.2【制备】将上述成分溶于水中，校正pH，分装试管，每管2～3ml，至121℃灭菌15min备用【接种】将待检菌接种培养基内，经35℃培养18～24h质量控制】大肠埃希菌，生长极好，靛基质（+）伤寒沙门菌，生长良好，靛基质（-）金黄色葡萄球菌，生长良好，靛基质（-）★血液增菌培养基【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌成分】牛肉浸液1L眎胨或多价蛋白胨10氯化钠5葡萄糖3～枸橼酸钠3酵母浸膏3琼脂0.75 0.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4【制备】将上述各成分混合校正pH。
分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶，每瓶50ml高压灭菌（121℃15min）后，无菌手续加入灭菌硫酸镁(24.65%)溶液1ml也可选用各种商品血液培养系统★葡萄糖肉汤【用途】用于血液增菌成分】蛋白胨10氯化钠5肉浸液（或心浸液）1L葡萄糖3枸橼酸钠3 0.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml 24.65%MgSO4?7H2O水溶液20ml青霉素酶1000U【制备】将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内，每瓶装50ml，高压灭菌115℃20min，每瓶加入青霉素酶50U，经无菌试验合格后，冷却备用接种】将采取的血液标本，以无菌手续注入培养液瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每日取出观察一次结果观察结果】经35℃培养，如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时做分离培养，可选用血琼脂、EMB及巧克力平板等无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去在观察的过程中，至于应做2次分离培养临床经验】1.枸橼酸钠为抗凝剂，使血液加入培养基中不凝固。
2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用4.本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3～0.5%酵母浸膏以增菌培养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，使细菌免受抗体破坏；加入SPS可提高检出率常用阳性及阴性球菌分离培养基★甘露醇琼脂【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用原理】根据致病葡萄球菌耐盐性强和发酵甘露醇的两大特性，在25g/L含盐量的甘露醇琼脂平板上能生长，并形成橙黄色均落，酚红指示剂起显色作用而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长因此该平板起选择性分离和鉴别作用成分】眎蛋白胨10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇10 0.2%酚红水溶液12.5ml蒸馏水1LpH7.4【制备】将上述成分（除甘露醇、酚红外）溶于水中，加热后溶解，校正pH后加入甘露醇和酚红水溶液，摇匀分装，经115℃15min灭菌，待冷却到50℃时倾注平皿，凝固后冷藏备用接种】取待检标本或增菌培养物划平板，置35℃培养18～24h观察结果】挑取橙黄色菌落，接种营养琼脂斜面，经培养后做涂片和其他生化鉴定。
质量控制】金黄色葡萄球菌，生长，菌落呈黄色，直径>1.0mm.表皮葡萄球菌，生长，菌落呈红色，直径〉1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌，基本不生长保存】置冰箱内，使用期限2～3d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间★哥伦比亚血琼脂【用途】供革兰阳性球菌分离用原理】培养基内含有萘啶酸和黏菌素，对革兰阴性菌有很强的抑制作用成分】胰酪蛋白胨12牛肉蛋白胨15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg萘啶酸15mg 琼脂粉12蒸馏水1L脱纤维羊血50mlpH7.2～7.4【制备】将上述各成分（羊血和抗菌药物除外）充分混合，加热溶解，调pH7.2～7.5，115℃15min灭菌待冷至50℃时加入脱纤维羊血。