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1、货号：MS2922规格：100管/48样土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitritereductase,S-NiR）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。测定原理：亚硝酸还原酶可将NO还原为NO使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NQ减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。自备实验用品及仪器：天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、低温离心机。试
2、剂的组成和配制：试剂一：液体4mLXl瓶，4C保存。试剂二：粉剂XI瓶，4C保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。试剂三：液体4mLX1瓶，4C保存。（如出现沉淀可以70-80C加热溶解）试剂四：液体10mLX1瓶，4C避光保存。（如出现沉淀可以70-80C加热溶解）试剂五：液体10mLX1瓶，4C避光保存。工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过3050目筛。测定操作表：空白管对照管测定管风干土样（g）0.020.02蒸馏水（卩L）40试剂一（卩L）4040试剂二（卩L）404040混匀后，25T反应1h试剂三（卩L）404040充分
3、震荡30S,10000rpm,4C，离心10min上清液（卩L）707070工作液（卩L）140140140充分混匀，测定540nm各管吸光值，分别记为A空白管、A对照管、A测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。计算公式:a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=1.5562X+0.0088,R2=0.996;x为标准品浓度（卩mol/mL）,y为吸光值（A标准管-A空白管）。酶活单位定义：每g土样每天还原1卩molNQ的量为一个酶活力单位。S-NiR（卩mol/d/g土样）=A空白管-（A测定管-A对照管）-0.0088-1.5562XV标十WT=0.617XA空白
4、管-（A测定管-A对照管）-0.0088-WT:反应时间，1h=1/24d;V标：标准液体积，0.04mL;W样本质量，g。b.使用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=0.7781X+0.0088,R2=0.996;x为标准品浓度（卩mol/mL）,y为吸光值（A标准管-A空白管）。酶活单位定义：每g土样每天还原1卩molNO2的量为一个酶活力单位。S-NiR（卩mol/d/g土样）=A空白管-（A测定管-A对照管）-0.0088-0.7781XV标十WT=1.234XA空白管-（A测定管-A对照管）-0.0088-WT:反应时间，1h=1/24d;V标：标准液体积，0.04mL;W:样本质量，g。注意事项：1. 配制好的工作液3天内使用完。2. 若吸光值超过1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。3. 严格控制显色时间，否则会对结果有影响。4. 标准曲线线性范围为0.03卩mol/mL-1.5卩mol/mL。5. A空白管-（A测定管-A对照管）线性范围为0.02-1.5。第1页，共2页
