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1、 分子生物学实验报告目录3700字 目录摘 要 . 11.前言. 22.实验. 22.1 实验材料 . 22.2 试剂 . 22.2.1质粒DNA提取 . 22.2.2质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 . 22.2.3 质粒载体和外源DNA的连接反应 . 22.2.4感受态细胞的制备及转化 . 22.2.5地高辛标记的Southern杂交 . 32.2.6 RNA分离与纯化 . 32.2.7 RT-PCR扩增目的基因cDNA . 32.2.8小麦基因组DNA提取、酶切及电泳分析 . 32.3 实验器材 . 42.3.1质粒DNA提取 . 42.3.2质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 . 4
2、2.3.3 质粒载体和外源DNA的连接反应 . 42.3.4感受态细胞的制备及转化 . 42.3.5地高辛标记的Southern杂交 . 42.3.6 RNA分离与纯化 . 52.3.7 RT-PCR扩增目的基因cDNA . 52.3.8小麦基因组DNA提取、酶切及电泳分析 . 52.4 实验步骤 . 52.5实验结果 . 62.6 分析讨论 . 113.参考文献 . 134.附 录 . 145.致谢. 错误！未定义书签。第二篇：分子生物学实验 目录 36200字1 实验概述1 实验概述1.1 实验目的实验过程中，主要通过碱裂解法提取质粒DNA、对质粒进行双酶切、并连接构建成重组DNA分子、大
3、肠杆菌DH5感受态细胞的制备、感受态细胞的转化以及目的蛋白质gfp的正常表达，来完成一系列分子生物学基础实验。通过本实验，学习并掌握碱裂解法、双酶切、氯化钙法制备感受态细胞的制备及采用互补现象进行重组DNA鉴定的原理和方法。1.2 实验原理质粒是细菌内共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型，经过改造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介，这种基因的运载工具在基因工程中具有极广泛的用途。本次实验中，分子克隆质粒载体T所携带的外源基因是gfp绿色荧光蛋白，实验的最终目的是将gfp基因插入表达载体P中，组成重组子，并导入到大肠杆菌细胞中并诱导其表达，培养出
4、绿色的大肠杆菌菌落。为此，我们要利用碱变性法将大肠杆菌中的质粒DNA提取出来，并通过Hand和NCO两种酶的双酶切作用，从而获得目的外源基因片段gfp和表达载体-P质粒的DNA，然后通过连接酶连接后形成重组子，并通过氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞中，让其在含有Amp和IPTG的LB琼脂平板上生长繁殖，最后通过观察大肠杆菌能否在含有Amp和IPTG的LB平板上长出绿色的菌落，来判断gfp基因工程菌的构建效果。1广东工业大学现代分子生物技术实验报告2 实验流程2.1 实验安排表实验内容 质粒T、质粒P的提取 电泳检测质粒提取效果确定质粒提取成功后，利用Hind 、Nco这2种限制性内1011 h切
5、酶分别对质粒T、质粒P进行双酶切电泳检测酶切情况，若酶切成功，利用试剂盒回收DNA片断利用T4 DNA连接酶进行连接 大肠杆菌感受态细胞的制备 转化（gfp基因导入受体细胞）重组子的筛选（在含有Amp的LB平板上筛选） 诱导表达与鉴定（加入诱导物IPTG诱导gfp表达）45 min 1416 h 3 h 2 h 1216 h 1216 h 时间安排 3 h 3045 min2.2 实验流程图 质粒DNA的提取与纯化 碱液裂解法；乙醇洗涤纯化（T-gfp质粒作为克隆载体、P32作为表达载体） 通过观察电泳图片，来鉴定T、P两种质粒DNA的提取结果 琼脂糖凝胶电泳的方法 对成功提取的T、P两种质粒DNA进行双酶切 限制性内切酶Hand、Nco T-gfp、P两种质粒的DNA片段的回收 割胶（试剂盒快速回收）用刀片把凝胶上的目的DNA条带割取下来 连接T-gfp、P两种质粒的目的DNA T4噬菌体DNA连接酶（重组DNA分子的构建） 大肠杆菌感受态细胞的制备 氯化钙法22 实验流程 将连接后的重组DNA分子导入大肠杆菌感受态细胞 感受态细胞的转化
