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1、第五章第五章 检疫性真菌病害检疫性真菌病害uu 小麦矮腥黑穗病小麦矮腥黑穗病小麦矮腥黑穗病小麦矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt Wheat dwarf bunt v 小麦印度腥黑穗病小麦印度腥黑穗病 Wheat karnal buntw 烟草霜霉病烟草霜霉病 Tobacco blue moldx马铃薯癌肿病马铃薯癌肿病 Potato warty榆树枯萎病榆树枯萎病 Dutch elm disease复习思考题植物检疫性真菌常见检疫检验技术植物检疫性真菌常见检疫检验技术n n直接检验直接检验n n染色检验染色检验n n洗涤检验洗涤检验n n保湿萌芽检验保湿萌芽检验n n分离培养检验分
2、离培养检验n n适用范围：具明显症状的植物材料n n主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用肉眼现场快速初检n n原理：染病的组织，或病原菌本身，经特殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色n n例如：马铃薯癌肿病（Synchytriumendobioticum）薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1的“藏花红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。n n原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。n n主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、吐温溶液等n n主要试验流
3、程如下：称取样品洗脱孢子（振荡）离心富集镜检计数n n影响检验结果的因素：种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来；离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子；将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀；操作不够严格，造成人为误差。n n原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。n n主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。n n主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。n n吸水纸法无菌吸水纸（3层
4、）灭菌培养皿 吸水1培养、观察12h光照黑暗交替恒温所观察到的结果示意图如下n n常规植物病理学方法小麦矮腥黑穗病小麦矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt Wheat dwarf bunt分布：分布：是麦类黑穗病中危害最大、防治最难的一种病害，它于1847年及1860年先后发现于捷克和美国，在全世界范围内传播和蔓延，目前已在欧洲、北美、南美、澳洲、亚洲、非洲等40多个国家发生。寄主：寄主：禾本科5个族，18个属，65个种。主要栽培植物有冬小麦、大麦、黑麦，冰草属为天然发病的主要禾草寄主。危害性：1962年美国减产，1972年西部7州，平均减产17，损失1. 2亿Kg。菌瘿可存活10年以
5、上。症状症状：系统侵染性，表现为：病株特矮（1/31/2），分孽特多（1倍），病穗特密，病粒特硬，有鱼腥臭味。病原菌：病原菌：病原菌：病原菌：TilletiaTilletiacontroversacontroversa J.G. J.G. KhnKhn,inRabenhorst,inRabenhorst,HedwigiaHedwigia 1313:188(1874):188(1874) Position in classification:Position in classification:Tilletiaceae,Tilletiales,Exobasidiomycetidae,Ustila
6、ginomycetes,Tilletiaceae,Tilletiales,Exobasidiomycetidae,Ustilaginomycetes,Basidiomycota,FungiBasidiomycota,Fungi形态特征形态特征形态特征形态特征：冬孢子冬孢子 ，冬孢子萌发冬孢子萌发。生物学特征：生物学特征：生物学特征：生物学特征：冬孢子萌发冬孢子萌发-2-21515（3838） ，弱光，弱光400400600lx600lx，土壤含水量土壤含水量35358888，萌发周期长，萌发周期长33个月。冬孢子内含有个月。冬孢子内含有内源孢子萌发抑制剂。内源孢子萌发抑制剂。生理分化：生理分化
7、：生理分化：生理分化：美国美国1515小种，德国小种，德国8 8个小种。个小种。初侵染来源：初侵染来源：初侵染来源：初侵染来源：土壤带菌，冬孢子可存活土壤带菌，冬孢子可存活1 1年，菌瘿可存活年，菌瘿可存活3 31010年。年。传播：传播：传播：传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水。种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水。发病规律发病规律发病规律发病规律：侵染期长，侵染期长，1212月月4 4月，月，1 12 2月是盛期，月是盛期，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，5050天到生长点，天到生长点，随寄主生长，菌丝进入穗原始体，到各个花器，随寄主生长，菌
8、丝进入穗原始体，到各个花器，破坏子房，形成冬孢子堆。长时间破坏子房，形成冬孢子堆。长时间3 38 8 低温利低温利于侵染；冬麦区苗期日平均温度于侵染；冬麦区苗期日平均温度0 010 10 达达45d45d以以上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。TCKTCK的循环的循环的循环的循环: :流行因素流行因素流行因素流行因素：大面积感病品种、足够菌源、冬季日大面积感病品种、足够菌源、冬季日均温均温0 010 10 的日数的日数40d40d、稳定积雪稳定积雪70d70d以上，以上，积雪厚度积雪厚度10cm10cm以上。以上。国内适生区域：国内适生区域：国内适生区域：国内适
9、生区域：西北高原冬麦区和新疆、青藏高西北高原冬麦区和新疆、青藏高原晚播冬麦区极为适宜病害的发生，属高度危险原晚播冬麦区极为适宜病害的发生，属高度危险区；江淮流域及华北、东北冬麦区基本适合病害区；江淮流域及华北、东北冬麦区基本适合病害发生，属危险区；西南高海拔地区有时也具备病发生，属危险区；西南高海拔地区有时也具备病菌入侵条件，也可能受害；春麦区不发病。菌入侵条件，也可能受害；春麦区不发病。检验与检测：检验与检测：直接检查：放大镜直接检查：放大镜菌瘿菌瘿洗涤检查：洗涤检查：50g50g100ml100ml无菌水，振荡无菌水，振荡5min5min，101015ml15ml离心离心3min3min，
10、定容，制片观察。定容，制片观察。冬孢子鉴定：孢子形态鉴定（冬孢子鉴定：孢子形态鉴定（网脊高度、胶鞘厚网脊高度、胶鞘厚度、网目径、孢子大小、不育细胞等）度、网目径、孢子大小、不育细胞等）。冬孢子自发荧光实验：冬孢子自发荧光实验：TCKTCK孢子于荧光显微镜下孢子于荧光显微镜下有自发荧光现象，而有自发荧光现象，而TCTTCT孢子则无。孢子则无。冬孢子萌发试验：冬孢子萌发试验：5 5 、1717 下，光照。矮腥孢下，光照。矮腥孢子子5 5 下下21d21d开始萌发，开始萌发， 1717 不萌发。不萌发。PCRPCR技术：引物技术：引物5-TGACAACGGATCTCTTGGTT-5-TGACAACG
11、GATCTCTTGGTT-33、 5-TCACCAACTCCAAGCAATCT-3,206bp5-TCACCAACTCCAAGCAATCT-3,206bp处有特异扩增带。处有特异扩增带。检疫和防治检疫和防治进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处理理带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，13030min13030min或或120 1h120 1h。病区用病区用4040五氯硝基苯，种子重量五氯硝基苯，种子重量的药量拌的药量拌种，并在播种沟内施药处理。或
12、单用种，并在播种沟内施药处理。或单用1 1的药量的药量拌种拌种重病地应轮作倒茬或改种春小麦。冬小麦晚播重病地应轮作倒茬或改种春小麦。冬小麦晚播可减轻发病。可减轻发病。种植抗病品种。种植抗病品种。小麦印度腥黑穗病Wheatkarnalbunt分布：分布：印度、巴基斯坦、尼泊尔、阿富汗、伊拉克、土耳其、黎巴嫩、叙利亚、原苏联、瑞典、美国、墨西哥、澳大利亚等。寄主寄主：小麦、硬粒小麦、六倍体小麦危害及重要性危害及重要性：产量影响不大，对品质影响较大，3%面粉具臭味（三甲胺）。症状症状：局部侵染性，部分黑穗病，麦粒的一部分被侵染，小穗顶端麦粒黑斑，颖片张开，主要侵染胚乳，一般不侵染胚，在种子腹面表皮下
13、形成冬孢子堆，背面胚乳部分仍完好。病原菌病原菌病原菌病原菌： TilletiaTilletia indicaindica MitraMitra 异名：异名：NeovossiaNeovossia indicaindicaPosition in classification:Position in classification:TilletiaceaeTilletiaceae, ,TilletialesTilletiales, ,ExobasidiomycetidaeExobasidiomycetidae, ,UstilaginomycetesUstilaginomycetes, ,Basidio
14、mycotaBasidiomycota,Fungi,Fungi冬孢子冬孢子冬孢子冬孢子：棕褐色，球形，近球形，棕褐色，球形，近球形，222249m 49m ，外壁棘外壁棘状突起，状突起，5m 5m ；未成熟黄色，透明胶质鞘，成熟消失，未成熟黄色，透明胶质鞘，成熟消失，外壁有尖形尾丝。不孕细胞球形，近球形，泪珠状，半透外壁有尖形尾丝。不孕细胞球形，近球形，泪珠状，半透明，淡黄褐色，附着菌丝体残体，明，淡黄褐色，附着菌丝体残体，131333m 33m 。冬孢子萌发冬孢子萌发冬孢子萌发冬孢子萌发：4 4月以上休眠期，萌发产生月以上休眠期，萌发产生1010190m 190m 先菌先菌丝，上产生丝，上产
15、生6565185185个担孢子，长镰刀形，可不配对结合，个担孢子，长镰刀形，可不配对结合，而直接产生芽管，作侵染菌丝用。而直接产生芽管，作侵染菌丝用。A partially mature teliospore showing ornamentation in median view A partially mature teliospore showing ornamentation in surface view 初侵染来源：初侵染来源：种子带菌，土壤带菌，秸秆和粪肥等带菌。冬孢子可存活5年。传播：传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水;也可气传。生理分化：生理分化：异宗配合，印
16、度7个生理小种。发生规律：发生规律： 冬孢子萌发的适温1522 ，扬花期先菌丝产生的担孢子随气流传播到麦穗上，产生次生担孢子，上生芽管，从颖片、外稃和内稃开张的气孔侵入。 在一定温度范围内，该病流行与湿度正相关，与温度反相关。因此，扬花期遇多云、寡日照、细雨多雾的高湿天气适宜发病。检验方法检验方法：直接检查：根据病粒的特有症状鉴定直接检查：根据病粒的特有症状鉴定洗涤检验洗涤检验发病轻的麦粒可用发病轻的麦粒可用NaOHNaOH浸浸24h24h（18182525），），吸去多余液体，实体显微镜下观察。乌黑发亮的吸去多余液体，实体显微镜下观察。乌黑发亮的种子有病，淡褐色无病。种子有病，淡褐色无病。PCRPCR技术：技术：扩增引物为扩增引物为5-5-CGTGTGAGCCATGCTACGACT-3CGTGTGAGCCATGCTACGACT-3和和5-5-AACTTCCAAGGCGACCGTTT-3AACTTCCAAGGCGACCGTTT-3，在，在743bp743bp处有处有一特异性扩增带，其他近似种或相关种均未出现一特异性扩增带，其他近似种或相关种均未出现该扩增带。该扩增带。检疫和防治：检疫和
