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1、本文格式为Word版，下载可任意编辑酶解蛋白粉中小肽含量的检测方法 发酵豆粕的检测除常规指标外，还应检测以下指标 酶解蛋白粉中小肽含量的检测方法 1、 原理：利用三氯醋酸作蛋白质沉淀剂，将酶解蛋白粉中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，经离心、过滤、消化、蒸馏，测定其蛋白质量。本方法是参照中华人民共和国轻工业标准大豆肽粉标准(QB/T2653-2022)根基上修订而来。 2、 试剂及仪器： ）100ml烧杯； ）10ml，25ml移液管； ）干过滤装置； ）半微量粗蛋白质测定试剂和装置； ）15%三氯醋酸溶液（TCA溶液）； ）4000转分钟的离心机。 3、 方法：切实
2、称取样品3克于100ml烧杯中，参与15%（三氯乙酸）溶液25毫升，混合平匀，静置5分钟。将溶液定量转移，在4000转分钟下离心10分钟后，取全部上清夜，用干的滤纸过滤，切实移取其滤液10ml于消化管中，按测定粗蛋白质方法消化、定容（100ml）、移取10ml消化液蒸馏，测定其粗蛋白质含量（半微量定氮法）。同时做空白试剂。 4、 结果： 小肽（占干基）(VV。)C(HCI)6.250.0142.5(25ml10ml) 10(100ml10ml)m100% 式中：V-样品消耗HCI的体积，ml； V。-空白消耗HCI的体积，ml； C(HCI)-盐酸的摩尔浓度moN； 6.250.014-蛋白质
3、转换系数。 m-称取样品质量，g。 小肽（占蛋白质）小肽（占干基）粗蛋白质100 重复性：A)每个试样取两个平行举行测定，以其算术平均值为结果； B)允许十足便差为10% C)以小肽占粗蛋白质的百分含量上报结果。 注：小肽含量还应减去氨基酸态氮 1 1 氨基酸态氮含量检测 1、 原理 利用氨基酸的两性作用，参与甲醛以固定氨基的碱性，使基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点。 1)试剂 2)甲醛(36%) 3)氢氧化钠标准滴定溶液c(NaOH)0.050mol/L。 4)仪器 5)酸度计 6)磁力搅拌器 7)10ml微量滴定管。 2、分析步骤 吸取5.0mL样品，置于100
4、mL容量瓶中，加水至刻度，混均后吸取20.0mL，置于200mL烧杯中，加60mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液c(NaOH)0.050mol/L滴定至酸度计指示pH9.6记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）的毫升数，可计算总酸含量。 参与10.0mL甲醛溶液，混均。再用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）调理至pH为8.2，再参与10.0mL甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）滴定至pH9.2，同时做好试剂空白试验。 3、计算 (V1-V2) XC1 X0.014 X1- 100 5XV3/100 式中：X1-样品中氨基酸态氮的含量，g/100m
5、L； V1-测定用样品稀释液参与甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL； V2-试剂空白试验参与甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL； V3-样品稀释液取用量，mL； C1-氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，mol/L； 0.014-与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液c(NaOH)mol/L相当氮的质量，g。 结果的表述：报告算术平均值的两位有效数。 1 2 酸 度 检 测 乳酸的测定NaOH 滴定法 取发酵豆粕样品10.00g，加蒸馏水90.00mL，搅拌30min 后，3000rpm 离心5min。取10.00mL上清液参与40mL蒸馏水后，用0.1M 的标准NaOH溶液(C)滴定，
6、至溶液pH=8.2 为滴定终点。记录消耗的NaOH的体积，记为V (mL)。 乳酸含量（%） C (V-V0) 90.08 100% C: 标准NaOH溶液的摩尔浓度（moL/L） V: 样品消耗标准NaOH溶液的体积数（mL） V0: 未发酵豆粕滴定消耗标准NaOH溶液的体积数（mL） 90.08: 乳酸的分子量 0.1M NaOH标准溶液的配制： 称取NaOH 4g，加水溶解后转移至1000mL容量瓶中，定容至刻度即可。（配制溶液所用水为煮沸并冷却后的蒸馏水。） 0.1M NaOH标准溶液的标定： 细致称取0.6g(切实至0.0001g)在105110枯燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，加50
7、mL新煮沸的冷蒸馏水，振荡使其溶解，加2 滴酚酞指示剂，用配制的NaOH标准溶液滴定至溶液呈微红色30 秒不退，同时做空白测验对照。 CNaOH = m / (V1-V2) 0.2042 m: 邻苯二甲酸氢钾的重量（g） V1: 标准NaOH溶液的用量（mL） V2: 空白样消耗标准NaOH溶液的用量（mL） 1 酚酞乙醇溶液： 称取1g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中。 1 3 豆粕中氢氧化钾蛋白质溶解度的测定 GB/T195412022 1、方法原理 氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映大豆粕产品加热过度的处境。不同加热程度的大豆粕，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。先测定大豆样品在规定的条件下，可溶于
8、氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；在测定同一大豆样品中总的粗蛋白质含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。 2、试剂 除非另有说明，在分析中使用确认为分析纯的试剂，所用的水为GB/T6682中规定的三级水。 0.2%氢氧化钾溶解：2.44g氢氧化钾溶于水中，稀释并定容至1L。 3、仪器、设备 1)测验室用样品粉碎机。 2)样品筛：孔径0.25mm。 3)分析天平：感量0.0001g。 4)磁力搅拌器。 5)离心机：转速为2700r/min以上。 4、样品的制备 取具有代表性的大豆粕样品，用四分法缩减分取200g左右，粉碎过0.25mm孔径的样品筛，充分混均，装入磨口瓶中备用。 5、测定步骤 称取大豆粕试
9、样1.0g，精确到0.1mg置于250mL高型烧杯中，参与50.00mL0.2%氢氧化钾溶解，在磁力搅拌器上搅拌20min，将溶液转移至离心管中，以2700r/min离心10min，提防移取上清液15mL，放入消化管中，按的规定测定粗蛋白质含量，同时测定同一试样的粗蛋白质含量。 结果计算： 氢氧化钾蛋白质溶解度X，数值以质量分数表示，按式(1)计算： W1 X=- 100-(1) W2 1 4 式中： W1-大豆粕试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量，% W2-大豆粕试样总的粗蛋白质含量(以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果)，% 计算结果表示到小数点后一位。 豆粕中氢氧化钾蛋白质溶解度(%)70.0 6、细致度 1)重复性 同一测验室，由同一操作员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于2%；以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。 2)在现性 在不同测验室，由不同操作员用不同的仪器设备完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于4%。 1 5 7
