云师大植物生理学

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1、本文格式为Word版,下载可任意编辑云师大植物生理学 本科学生综合性测验报告 学号: 114120226 姓 名: 段霞飞 学院: 生命科学学院 专业、班级:11级生物科学C班 测验课程名称:光合色素的提取、理化性质、分开、吸收光谱 及含量的测定 教 师: 李忠光 开 课 学 期: 2022 至 2022 学年 其次 学期 填 报 时 间: 2022 年 4 月 21 日 云南师范大学教务处编印 一测验设计方案 测验序号 测验二 测验名称 光合色素的提取、理化性质、分开、吸收光谱及含量的测定 测验时间 2022年3月、4月 测验室 睿智3栋 428 (一)测验目的 1、掌管光合色素的提取方法以

2、及了解有关的理化性质。 2、掌管光合色素的分开方法以及了解有关的吸收光谱。 3、掌管用分光光度计测定叶绿素含量的方法。 (二)测验原理及测验流程或装置示意图 I 光合色素的提取与理化性质: 光合色素能溶于具有确定极性的有机溶剂,如丙酮、乙醇等。 提取液中无任何电子受体,因此可以查看荧光现象。 离体叶绿素在有氧气和光照条件下,发生光氧化作用,布局遭到破坏,形成加氧叶绿素等产物。 叶绿素是一种双羧酸酯,可以发生皂化回响。 叶绿素分子中Mg2+与仆啉环结合不稳定,可以被H+、Cu2+、Zn2+等离子所取代。 II 光合色素的分开与吸收光谱: 光合色素能溶于具有确定极性的有机溶剂,如丙酮、乙醇等。 不

3、同光合色素的分子量、分子布局、极性、溶解度、支持物对它们的吸附力等不同,因而调配系数不同,故彼此可以分开。 叶绿素的卟啉环布局对光有很强的吸收,主要是红光和蓝紫光。 III 光合色素含量的测定 混合液中的两个或多各组分,只要它们的光谱吸收峰不彼此重叠,依旧可以根据Lambert-Beer定律(A = k L C)求出各组分含量。Lambert定律:A = k L;Beer定律A = k C。叶绿素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分别为663nm、645nm,由此得出:见推导过程 Ca = 12.7 A663 2.69 A645;Cb = 22.9 A645 4.68 A663 Ca+b =

4、8.02 A663 + 20.20 A64 (三)测验设备及材料 1、主要测验用具和仪器 研钵、试管、滤纸三角瓶天平滤纸条分光光度计离心机离心管A4纸吸管。 2、药瓶和试剂 CaCO3石英砂丙酮20%KOH甲醇溶液苯50%醋酸醋酸铜粉末四氯化碳80%苯丙。 3、测验材料:植物绿色叶片 (四)、测验方法步骤 I 光合色素的提取与理化性质 光合色素的提取:将植物叶片洗净并用滤纸洗干,切实称取2 g,放入研钵中并参与少许CaCO3和石英砂及5 ml丙酮,充分研磨,再参与10 ml丙酮,研磨,静止片刻,上清液过滤于三角瓶中,待用。 查看荧光现象:与光线垂直的方向查看色素颜色。 光破坏作用:1ml色素提

5、取液于室内,1ml于太阳光下,30min后查看颜色变化。 皂化回响:取一支试管,参与色素提取液2.5ml,再参与30%KOH甲醇溶液1ml,摇匀,再参与苯2.5ml,轻轻摇动,沿试管壁逐渐参与自来水1ml,轻轻摇动后查看,留神查看整个过程颜色的变化。 取代回响:取一支试管,参与3ml色素,逐滴参与50%醋酸直至溶液变为黄褐色。倒出一半,参与少许醋酸铜粉末,酒精灯上加热,与另一半对比颜色的差异。 吸收光谱的变化:皂化和取代回响后的色素举行吸收光谱分析。 II 光合色素的分开与吸收光谱 光合色素的提取:将植物叶片洗净并用滤纸洗干,切实称取2 g,放入研钵中并参与少许CaCO3和石英砂及5 ml丙酮

6、,充分研磨,再参与10 ml 丙酮,研磨,静止片刻,上清液过滤于三角瓶中,待用。 光合色素分开:剪取适当长度和宽度的滤纸条 用上行纸层析法分开色素 启动剂:石油醚:丙酮:苯=10:2:1。 吸收光谱的测定: 光合色素的吸收光谱:取色素溶液1 mL,参与丙酮3 mL,摇匀后在分光光度计上400到700 nm处每隔10 nm举行扫描。 各色素的吸收光谱:上述层析出的34种色素,分别剪下后溶于3 mL丙酮中,按上述方法扫描。 III 光合色素含量的测定 方法一:快速测定法 由于叶绿素a、b在652nm处有共同吸收,k = 34.5 L g-1. cm-1。可直接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿

7、素含量,结果浓度单位为mg/dm2。 方法二: 分光光度计法 色素提取:将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干,切实称取已知的叶圆片0.05g左右,参与少许CaCO3和石英砂及80%丙酮2ml,充分研磨,转入离心管中(离心机使用),再用5ml 80%丙酮洗研钵,转入离心管中,平衡,5000rpm离心10min, 记录上清液体积,取1ml稀释到4ml。 测定:以1cm比色皿分别测定A663、A645。使A操纵在0.1 0.8之间。 (五)、测验结果与议论 1、测验现象数据及查看结果: 光合色素含量测定 测验数据及计算 三类色素浓度: =0.862 =0.418A 由公式: 各叶绿素含量: V=10ml W=0.05g 由公式: =9.822mg/L =5.538mg/L 叶片面积: GSM=70-105 W=0.47g 5

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