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1、病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程第二篇第二篇 色谱分析技术色谱分析技术病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程一、色谱法的一、色谱法的起源起源、发展及定义、发展及定义概概 述述病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程一、色谱法的起源、一、色谱法的起源、发展发展及定义及定义 柱色谱柱色谱薄层色谱和纸色谱薄层色谱和纸色谱气相色谱气相色谱毛细管柱毛细管柱色谱色谱高效液相色谱高效液相色谱
2、薄层扫描仪薄层扫描仪毛细管电泳毛细管电泳色谱色谱- -光谱联用、多维色谱、智能色谱。光谱联用、多维色谱、智能色谱。液相色谱（经典）液相色谱（经典）病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程气气质质联联用用病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极又称层析法，是一种依据物质的性质（溶解性、极性、离子交换能力、分子大小等）的不同，当
3、流动相携性、离子交换能力、分子大小等）的不同，当流动相携性、离子交换能力、分子大小等）的不同，当流动相携性、离子交换能力、分子大小等）的不同，当流动相携带样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新带样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新带样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新带样品流经固定相时，样品各组分在两相中不断的重新分配，最终达到分离与提纯，以便于对样品进行定性和分配，最终达到分离与提纯，以便于对样品进行定性和分配，最终达到分离与提纯，以便于对样品进行定性和分配，最终达到分离与提纯，以便于对样品进行定性和定量分析的分析方法。定量分析的分析方法。定量分析的分析方法。定量
4、分析的分析方法。一、色谱法的一、色谱法的起源起源、发展及、发展及定义定义病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程二、色谱法的分类二、色谱法的分类按两相状态不同分类按两相状态不同分类按操作方法不同分类按操作方法不同分类按色谱分离过程的原理不同分类按色谱分离过程的原理不同分类病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程按两相状态不同分类按两相状态不同分类 色谱其中的一相固定不动，称为色谱其中的一相固定不动，称为固定相固定相; ; 另一相是携带试样混合物流过此固定相
5、的流体另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为（气体或液体），称为流动相流动相。两两相相状状态态流动相流动相的物态的物态液相色谱液相色谱（LCLC）气相色谱气相色谱（GCGC）病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程二、色谱法的分类二、色谱法的分类按两相状态不同分类按两相状态不同分类按操作方法不同分类按操作方法不同分类按色谱分离过程的原理不同分类按色谱分离过程的原理不同分类病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程按操作方法不同分类按操作
6、方法不同分类柱色谱柱色谱纸色谱纸色谱薄层色谱薄层色谱病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程二、色谱法的分类二、色谱法的分类按两相状态不同分类按两相状态不同分类按操作方法不同分类按操作方法不同分类按色谱分离过程的原理不同分类按色谱分离过程的原理不同分类病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程按色谱分离过程的原理不同分类按色谱分离过程的原理不同分类（1 1）吸附色谱）吸附色谱（2 2）分配色谱）分配色谱（3 3）离子交换色谱）离子交换色谱（4 4）分子排阻色
7、谱（凝胶色谱法）分子排阻色谱（凝胶色谱法) )病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程色谱法色谱法GCGCLCLCCECE填充柱色谱法填充柱色谱法毛细管柱色谱法毛细管柱色谱法柱色谱柱色谱平面色谱法平面色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法经典液相色谱法经典液相色谱法吸附柱色谱吸附柱色谱分配柱色谱分配柱色谱离子交换色谱离子交换色谱凝胶色谱凝胶色谱薄层色谱法薄层色谱法纸色谱纸色谱毛细管电泳色谱法毛细管电泳色谱法病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程三、色谱过程三
8、、色谱过程病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程四、色谱曲线相关术语四、色谱曲线相关术语W：峰宽：峰宽Wh/2：半峰宽：半峰宽tR：保留时间：保留时间t0：死时间：死时间tR，：调整保留时间：调整保留时间色谱峰色谱峰基线基线病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程第七章第七章 薄层色谱法薄层色谱法病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 薄层色谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫薄层色
9、谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫平平面色谱法面色谱法。通常将固定相。通常将固定相( (吸附剂吸附剂) )均匀地涂铺在表面洁均匀地涂铺在表面洁净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成薄板薄板，进行样品分离。，进行样品分离。特点：快速特点：快速灵敏（用量小）灵敏（用量小）高选择性（如同分异构体）高选择性（如同分异构体）简便简便显色方便显色方便应用广泛：化合物的鉴别和少量化合物的分离应用广泛：化合物的鉴别和少量化合物的分离用于检测药品含量用于检测药品含量药物合成中用于鉴别反应程度和监控反应历程药物合成中用于鉴别反应程度和监控反应历程用于摸索高效液相的色谱条件用于摸
10、索高效液相的色谱条件病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程( (一一) )吸附色谱分离原理吸附色谱分离原理利用利用吸附剂吸附剂对不同成分对不同成分吸附力的大小吸附力的大小及及展开剂解吸展开剂解吸附附作用的差异作用的差异进行分离。进行分离。吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开剂移动快，一段时后，组分被分离。剂移动快，一段时后，组分被分离。固定相固定相: :固体固体吸附剂吸附剂流动相流动相: :液体展开剂液体展开剂一、基本原理一、基本原理第一节第一节 薄层色谱法的基本原理
11、薄层色谱法的基本原理病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程溶剂溶剂前沿前沿起始线起始线ABabc（1 1）比移值）比移值R Rf f：R Rf f是薄层色谱法基本是薄层色谱法基本定性定性参数，一定条件时参数，一定条件时R Rf f为为定值，在定值，在0 01 1之间，可用范围之间，可用范围R Rf f值在值在0.20.20.80.8之之间。组分极性越大，间。组分极性越大，R Rf f越小越小, ,反之越大反之越大。（二）比移值与相对比移值（二）比移值与相对比移值病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，
12、且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（2 2）相对比移值）相对比移值R Rs s：为消除系统误差为消除系统误差R Rf f1,1,R Rs s不一定小于不一定小于1 1。（二）比移值与相对比移值（二）比移值与相对比移值病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程二、吸附薄层色谱中吸附剂与展开剂二、吸附薄层色谱中吸附剂与展开剂常用的吸附剂：常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸附树脂附树脂等。等。吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离
13、化合物不反应物不反应（一）吸附剂（固定相）的选择（一）吸附剂（固定相）的选择病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（1 1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广）硅胶：极性吸附剂，应用范围广 物理吸附为主，氢键吸附为辅物理吸附为主，氢键吸附为辅 微酸性，不直接用于碱性成分的分离微酸性，不直接用于碱性成分的分离 机械强度好，适用于薄层色谱机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关吸附容量大，与羟基数目有关常用硅胶的规格：硅胶常用硅胶的规格：硅胶H H，硅胶，硅胶G G，硅胶，硅胶GFGF254254等等 病原体侵入机体，
14、消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（2 2）氧化铝：）氧化铝：a.a.极性吸附剂，较硅胶强。极性吸附剂，较硅胶强。 b. b.物理吸附为主，氢键吸附为辅物理吸附为主，氢键吸附为辅 c. c.微碱性，不直接用于酸类成分的分离微碱性，不直接用于酸类成分的分离碱性氧化铝碱性氧化铝：适用于适用于碳氢化合物、生物碳氢化合物、生物 碱以及其它碱性碱以及其它碱性化合物的分离。化合物的分离。中性氧化铝中性氧化铝：应用最广，适用于应用最广，适用于醛、酮、醛、酮、 醌以及酯类醌以及酯类化合物的分离。化合物的分离。 酸性氧化铝酸性氧化铝：适用于适用于有机酸
15、类有机酸类的分离。的分离。病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程 硅胶和氧化铝硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。含水量越高，吸附活性越弱。 只要在只要在110110左右加热，这些左右加热，这些“自由水自由水” ” 就能被可逆性就能被可逆性地除去。地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行利用这一原理可以对吸附剂进行活化活化（去水）和（去水）和脱脱活化活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。（加水）处理，以控制吸附剂的活性。 硅胶、氧化铝的含水量与活性级别硅胶、氧化铝的含水量与活性级别活性等级IIIIIIIVV氧化铝加水量/%0
16、361015硅胶加水量/%05152538病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程硅胶、氧化铝薄层：被分离物质硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。极性越大，越易被吸附。一般规律：一般规律：（1）官能团极性越大官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附；整个分子极性越大，越易被吸附；（2）形成分子内）形成分子内H键时，被吸附力减弱；键时，被吸附力减弱；（3）同系物中，）同系物中，分子量越大，极性越小分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。被吸附力越弱。常见官能团极性顺序：常见官能团极性顺序：烷烃烷烃烯烃烯烃醚类醚类硝基化合物硝基化合物酯类酯类酮类酮类醛类醛类硫醇硫醇胺类胺类醇类醇类酚类酚类羧酸类羧酸类被分离物质极性与吸附能力的关系被分离物质极性与吸附能力的关系病原体侵入机体，消弱机体防御机能，破坏机体内环境的相对稳定性，且在一定部位生长繁殖，引起不同程度的病理生理过程（二）展开剂（流动相）的选择（二）展开剂（流动相）的选择 硅胶、氧化铝薄层硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，：展开剂的极性越
