实验十高等植物总DNA的提取和纯化

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1、实验十实验十 高等植物总高等植物总DNA的提取和纯化的提取和纯化 实验目的实验目的学习提取、纯化高等植物总DNA的方法，理解其原理。 实验原理实验原理 植物细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA）称为总DNA。高等植物的DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为CTAB法和SDS法。十六烷基三甲基溴化铵(Cetyl triethylammonium bromiade, CTAB) 是一种阳离子去污剂，可以有效的裂解植物细胞壁，且与DNA形成可溶于高盐溶液的复合物，当降低盐浓度时D

2、NA又可沉淀析出，从而与蛋白质及多糖等分离。 PVP（聚乙烯吡喏烷酮）可以降低酚化合物的离子化，2-巯基乙醇作为还原剂可以防止酚类的氧化。本适用于提取新鲜植物以及干品、冷冻品的基因组DNA。实验材料实验材料山茶花叶用具和药品用具和药品研钵，恒温水浴锅，离心机，ml离心管，移液枪，吸头，琼脂糖电泳系统；2%CTAB（CTAB粉末20g/L、100mmol/L Tris-HCl、 NaCl、20mmol/L EDTA、6%PVP、2%-巯基乙醇、），氯仿/异戊醇（V/V:24/1），75%乙醇，无水乙醇，RNase，无菌水。 实验步骤实验步骤1、采集新鲜的山茶花叶，置于70冰箱冷冻几个小时。2、吸

3、水纸吸干叶子表面的水分，去主脉，撕成小片，加少量液氮，在研钵中研磨成粉末。ml离心管中，加入65预热的2%CTAB1000l和-巯基乙醇 20 l ，轻轻颠倒混匀，65水浴30min，期间摇匀2-3次。4、室温下静置10min，10000r/m离心5min。5、ml离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀，12000r/m离心10min。重复此步操作1次。ml离心管中，加入上清液体积2/3的20预冷异丙醇，轻轻混匀，直至出现絮状物。20静置10min后，10000r/m离心5min。7、弃去上清液，加入500l的75%乙醇，清洗DNA，小心弃去上清液。再加入500l的75%乙醇，重复操作1次。8、 再加入500l无水乙醇，清洗DNA，弃去上清液，倒置干燥DNA。9、 加入50lTE液和2l RNase，37水浴30min。4保存备用。电泳TBE缓冲液，100V电泳10min，观察电泳谱带。方法的简析冷冻和研磨，使细胞核破裂加入提取缓冲液，溶解DNA氯仿/异戊醇抽提，去除蛋白加入异丙醇，沉淀DNA酒精冲洗，去除剩余杂质RNase消化，去除RNA无菌水溶解，保存DNA电泳图作业观察电泳的结果，分析DNA提取的纯度的完整性。做出电泳图