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1、猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA ）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中圆环病毒抗原（PCV Ag ）的含量。实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中猪圆环病毒抗原（PCV Ag ）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的圆环病毒抗原（PCV Ag ）标准品和未知浓度的圆环病毒抗原（PCVAg ）待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄
2、色。颜色的深浅和样品中的圆环病毒抗原（PCVAg ）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（0D值）， 通过标准曲线计算样品中猪圆环病毒抗原（PCV Ag ）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlx 1 瓶标准品(36 On g/L )0.5mlx 1 B2链霉亲和素HRPbmlx 1 瓶标准晶 S2T48Ong/L)0.5mlx 1 瓶3酶标句被板12 7Ly 8 #8标准品 S3 ( 90 ng/l )0 5mlv 14生物素标记的抗抗体Amlv 1 瓶标准品 G4 ( 45 nq/l )0 Smlv 1 瓶5显色剂A液6ml* 1 瓶标准品 5X22, 5 nq/D-0-5x
3、nlx 16品色剂R滿6mly 1/Wg7 终止液6mlx 1瓶 10 封板膜2张标本要求不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融操作步骤1.2.3.4.5.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同） 品孔。然后在标准品孔中加入标准品501在样本反应孔中加入板膜，轻轻振荡混匀，37
4、C温育45分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸憾水 30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 重复4次，拍干。加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体钟、标准品孔、待测样 50微升样本，盖上封30秒后弃去，如此50。37C温育 30 分6. 洗涤：操作同4。7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入 50/J的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀，37C温育30分钟。8. 洗涤：操作同4。9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50,再加入显色剂 B50,轻轻震荡混匀，37C避光显色 15分钟.10. 终止：每孔加终止液 50，终止反应（此时蓝色立转黄色
5、）。门测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。注意事项1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3. 各步加样均应使用加
6、样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 如标本中待测物质含量过高（样本 OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数（x 5x n）。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。线性范围：10ng/L -360ng/L规格：96猪份/盒保存条件及有效期1. 试剂盒保存：；2-8 C o2. 有效期：6个月
