《ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术的建立及》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术的建立及（60页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技生物荧光肿瘤体外药敏检测技术术(ATP-TCA)的建立及其的建立及其 临床应用研究临床应用研究答辩提纲答辩提纲l第一部分：第一部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述l第二部分：第二部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量 l 标准的建立标准的建立l第三部分：第三部分：ATP-TCA技术的临床应用研究技术的临床应用研究第一部分ATPATP生物荧光肿瘤体外药敏检测生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述技术概述研究背景研究背景l 化化学学治治疗疗是是肿肿瘤瘤的的三三大大治治疗疗手手段段之之一一。近
2、近3030年年来来，虽虽然然某某些些恶恶性性肿肿瘤瘤的的化化学学治治疗疗有有明明显显改改善善，但但多多数数肿肿瘤瘤，特特别别是是实实体体瘤瘤疗疗效效仍仍不不理理想想。这这与与肿肿瘤瘤存存在在个个体体差差异异性性，以以及多重耐药性等因素有关。及多重耐药性等因素有关。l 因因此此如如何何选选择择有有效效药药物物，进进行行有有的的放放矢矢的的治治疗疗早早已已成成为化疗界所关注的问题。为化疗界所关注的问题。1. 主要的药敏检测方法及其主要的药敏检测方法及其存在的问题存在的问题药敏检测方法药敏检测方法存在问题存在问题 集落形成法集落形成法（HTCA）标本可评价率低，仅有4070。实验周期长，需要2周以上
3、测试药物种类和数量有限操作繁琐，难以标准化阳性预测值较低，仅有4060四唑蓝比色法四唑蓝比色法 (MTT)敏感性较差，最低仅能检测500个细胞量程较小，有效量程在2.0以内细胞毒性差异染细胞毒性差异染色法色法 (DiSC)可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤人为判断因素较大，难以推广标本可评价率不高，仅有7080阳性预测值较低，仅有7080胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷掺入法掺入法 (3H-TdR)实验人员接触放射，不利于健康标本可评价率不高，仅有7080测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞对某些药物的测试结果存在假阴性理想的药敏检测方法应该理想的药敏检测方法应该具备的条件具备的条件1.操作简
4、便，可以标准化，便于推广操作简便，可以标准化，便于推广2.标本可评价率高标本可评价率高3.检测敏感、可靠、客观检测敏感、可靠、客观4.4. 具备产业化条件具备产业化条件2. ATP生物荧光药敏检测技术的优点生物荧光药敏检测技术的优点: :敏感性好敏感性好可检测最少可检测最少1010个细胞。而其他技术则一般需要个细胞。而其他技术则一般需要500500个细胞以上个细胞以上可评价率高可评价率高标本可评价率在标本可评价率在90%90%以上以上快速检测快速检测完成完成ATPATP检测仅需检测仅需3030分钟，而其它方法需分钟，而其它方法需1 14 4小时的孵育时间小时的孵育时间量程宽量程宽 检测线性范围
5、为检测线性范围为1010100000100000个细胞个细胞/ /孔（孔（9696孔培养板）孔培养板）精密度好精密度好变异系数（变异系数（CVCV）小于小于10%10%，在国家标准（，在国家标准（10%10%）的范围内）的范围内结果准确结果准确整体预测值为整体预测值为86%86%检测效率高检测效率高同时动态检测评估化疗药物同时动态检测评估化疗药物6 6个剂量下对肿瘤的杀伤作用个剂量下对肿瘤的杀伤作用高通量检测高通量检测适合适合9696、384384、15361536孔板检测分析孔板检测分析自动化程度高自动化程度高实验数据计算机软件自动分析，分析结果直观可靠实验数据计算机软件自动分析，分析结果直
6、观可靠稳定性好稳定性好 具备产业化条件具备产业化条件 3. ATP-TCA技术原理：技术原理：在在有有氧氧条条件件下下, , 荧荧光光酶酶（luciferaseluciferase）可可以以催催化化荧荧光光素素（luciferinluciferin）释释放放出出荧荧光光（波波长长为为562562nmnm），同同时时ATPATP转转变变成成AMPAMP。所所释释放放的的荧荧光光强强度度与与胞胞内内ATPATP含含量量呈呈正正相相关关。细细胞胞死死亡亡后后，胞胞内内ATPATP迅迅速速水水解解，而而活活细细胞胞的的ATPATP含含量量基基本本恒恒定定。因因此此所所测测得得的的荧荧光光强强度度反反映
7、映了了活活细细胞胞的的数数量量。比比较较药药物物系系列列浓浓度度对对培培养养细细胞胞的的不不同同抑抑制制率率，参参照照相相应应判判断断指指标标，从从而而可可以以评评估估该该化化疗疗药药物物对对肿肿瘤瘤细细胞胞的的杀杀伤伤效果。效果。 ATP + Luciferin + O2 AMP + 2Pi + Photons +OxylaluciferinLuciferase荧光强度与活细胞数量的关系荧光强度与活细胞数量的关系4. .技术技术流程流程TumorSingle Cell suspensionMechanical andenzymatical dissociationIncubationfor
8、5-7 daysAddition of drugs/mediumATP-LuminescenceATP extractionand stabilizationSoftware EvaluationConstruction of dose-response plots5.适用肿瘤类型适用肿瘤类型 6.适用肿瘤标本类型适用肿瘤标本类型 神经母细胞瘤神经母细胞瘤 黑色素瘤黑色素瘤 甲状腺癌甲状腺癌 结直肠癌结直肠癌 乳腺癌乳腺癌 卵巢癌卵巢癌 胰腺癌胰腺癌 肉瘤肉瘤 胃癌胃癌 肺癌肺癌实体瘤标本实体瘤标本胸腹水胸腹水活检淋巴结标本活检淋巴结标本7. 国内外研究历史回顾国内外研究历史回顾1. 1. 1
9、. 1. 1982198219821982年年年年，MoyerMoyerMoyerMoyer等等等等首首首首先先先先提提提提出出出出内内内内源源源源性性性性ATPATPATPATP的的的的含含含含量量量量可可可可以以以以反反反反映映映映细细细细胞胞胞胞活活活活性性性性; ; ; ;随随随随后后后后KangasKangasKangasKangas等等等等相相相相继继继继证证证证实实实实生生生生物物物物荧荧荧荧光光光光技技技技术术术术是是是是一一一一种种种种敏敏敏敏感感感感、可可可可靠靠靠靠的的的的确确确确定定定定各各各各种种种种细胞活性的检测方法。细胞活性的检测方法。细胞活性的检测方法。细胞活性
10、的检测方法。2. 2. 2. 2. 自自自自1988198819881988年年年年，SevinSevinSevinSevin首首首首先先先先将将将将此此此此方方方方法法法法用用用用于于于于新新新新鲜鲜鲜鲜肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤组组组组织织织织的的的的药药药药敏敏敏敏检检检检测测测测，在在在在欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。欧洲和美国已经进行了大量的临床应用研究。3. 3. 3. 3. 1998199819981998年年年年，KurbacherKurbacherKurbacherKurbacher等等等等人人人
11、人报报报报道道道道了了了了ATP-TCAATP-TCAATP-TCAATP-TCA辅辅辅辅助助助助化化化化疗疗疗疗与与与与传传传传统统统统化化化化疗疗疗疗比比比比较较较较的的的的临临临临床床床床期期期期试试试试验验验验结结结结果果果果，试试试试验验验验结结结结果果果果表表表表明明明明，ATPATPATPATP- - - -TCATCATCATCA指指指指导导导导的的的的化化化化疗疗疗疗治治治治疗疗疗疗复复复复发发发发性性性性卵卵卵卵巢巢巢巢癌癌癌癌较较较较传传传传统统统统化化化化疗疗疗疗模模模模式式式式更更更更能能能能提提提提高高高高临临临临床床床床疗疗疗疗效效效效，延延延延长长长长病病病病人
12、人人人总总总总生生生生存存存存期和无进展生存期。期和无进展生存期。期和无进展生存期。期和无进展生存期。 4. 4. 4. 4. NIHNIHNIHNIH的的的的GOG GOG GOG GOG (Gynecologic (Gynecologic (Gynecologic (Gynecologic Oncology Oncology Oncology Oncology Group)Group)Group)Group)项项项项目目目目组组组组认认认认为为为为ATP-TCAATP-TCAATP-TCAATP-TCA是是是是最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目最有发展前途的一种药敏试验方法
13、，已纳入重点科研项目最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目最有发展前途的一种药敏试验方法，已纳入重点科研项目(1998)(1998)(1998)(1998)。5. 5. 5. 5. 至今该技术的临床应用相关文献已有至今该技术的临床应用相关文献已有至今该技术的临床应用相关文献已有至今该技术的临床应用相关文献已有200200200200余篇。余篇。余篇。余篇。 6. 6. 6. 6. 国内尚无该技术产业化的报道。国内尚无该技术产业化的报道。国内尚无该技术产业化的报道。国内尚无该技术产业化的报道。时间时间国家国家研究人研究人肿瘤类型肿瘤类型结论结论19881988年年美国美国Sevin
14、BU, Sevin BU, Peng ZLPeng ZL卵巢癌卵巢癌阳性预测值：阳性预测值：92%92%，阴性预测值：，阴性预测值：90%90%整体预测精确值：整体预测精确值：86%86%19901990年年日本日本Jinushi K, Jinushi K, HirabayashiHirabayashi胃癌胃癌预测精确性为预测精确性为88.9%88.9%19931993年年瑞士瑞士Koechli OR, Koechli OR, Avner BPAvner BP乳腺癌乳腺癌阳性预测值：阳性预测值：90%90%，阴性预测值：，阴性预测值：86%86%整体预测精确值：整体预测精确值：85%85%19
15、951995年年美、英、德美、英、德三国协作三国协作Andreotti PE Andreotti PE Cree IACree IA 顺铂耐受卵顺铂耐受卵巢癌巢癌整体预测精确值：整体预测精确值：92%92%19961996年年英国英国Cree IA, Cree IA, Kurbacher CMKurbacher CMIII/ IVIII/ IV期期乳腺癌乳腺癌整体预测精确值整体预测精确值：767619971997年年日本日本Kawamura H, Kawamura H, Ikeda KIkeda K胃肠道肿瘤胃肠道肿瘤阳性预测值：阳性预测值：64%64%，阴性预测值：，阴性预测值：100%10
16、0%整体预测精确值：整体预测精确值：84%84%20002000年年美国美国Konecny G, Konecny G, Crohns CCrohns CFIGO FIGO 期期卵巢癌卵巢癌阳性预测值阳性预测值：66%66%，阴性预测值阴性预测值：89%89%敏感性敏感性：95%95%，特异性特异性：44%44%20002000年年德国德国Mollgard L, Mollgard L, Tidefelt UTidefelt U急性非淋巴急性非淋巴细胞白血病细胞白血病阳性预测值阳性预测值：86%86%，阴性预测值阴性预测值：100%100%20012001年年美国美国OMeara AT, OMeara AT, Sevin BUSevin BU上皮性卵巢上皮性卵巢癌癌阳性预测值阳性预测值：83%83%，阴性预测值阴性预测值：56.5%56.5%ATP-TCA技术的临床相关性研究结果技术的临床相关性研究结果ATP-TCA与其它药敏检测方法的相关性与其它药敏检测方法的相关性ATP-TCAATP-TCA技术与技术与DiSCDiSC法的相关性法的相关性ATP-TCAATP-TCA技术与技术与MTTM
