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1、RhD阴性献血者鉴定结果分析Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统，Rh血型系统常见的抗原有D、C、c、E、e5种，使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E和抗e5种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，故一般只作D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。中国汉族人群中Rh阳性比例约为99.7%,Rh阴性比例0.2%0.4%1。根据红细胞表面D抗原的数量和质量不同及抗原性不同，将D抗原分为5种：（1）正常D，常见的D抗原。（2）弱D,D抗原数量减少，质量无变化。（3）部分D（表位不完全型D),D抗原数
2、量基本正常，但是缺失正常D抗原上部分抗原表位（质量减少）。（4)Del表型（表位不完全型弱D),D抗原数量减少，缺失部分D抗原决定簇（质量减少）。（5）增强D,D抗原数量大量增多，抗原性极大增加。弱D、部分D、Del表型由于抗原数量或质量减少，不能用常规血清学方法检出，需要通过间接抗人球蛋白试验（IAT）、吸收放散或基因检测方法证实其红细胞膜上D抗原的存在。如果献血者是弱D、部分D或Del表型，其血液输给Rh阴性受血者，可能刺激受血者产生抗D抗体，导致受血者再次输入弱D、部分D或Del表型血液时发生溶血性输血反应。为了解本中心血站确认为RhD阴性的献血者中，弱D、部分D、Del表型的比例，研究
3、者作了进一步的鉴定和分析，现将结果报道如下。1、资料与方法1.1一般资料选取2003-2009年本中心血站确认为RhD阴性，愿意接受进一步鉴定的献血者50例作为研究对象。1.2主要试剂RhD(IgM）血型定型试剂（上海血液生物医药有限责任公司）、RhD(IgG）血型定型试剂（北京金豪制药股份有限公司）、抗D(IgM+IgG）血型定型试剂（英国Millipore公司）、抗人球蛋白试剂（IgG）检测试剂（上海血液生物医药有限责任公司）。1.3方法1.3.1检测方法RhD血型常规检测采用平板法，将检测为RhD阴性的标本进行确认，确认采用试管法，用2种不同厂家生产的抗D试剂进行IAT，判读并记录实验结
4、果，所有操作严格按照试剂使用说明书进行。1.3.2进一步鉴定方法在中国医学科学院北京协和医学院输血研究所进行鉴定。（1）血清学试验：使用抗D(IgM+IgG）试剂进行盐水法筛选RhD阴性标本；筛选为阴性的标本采用IAT进行弱D或部分D鉴定；IAT试验采用人源性血清（中国医学科学院输血研究所、上海血液生物医药有限责任公司）和混合单克隆抗DRh1，批号：430000(DIAGAST）；再使用人源抗D血清对剩余标本进行吸收放散试验以检测Del表型。初筛阴性标本采用血清学常规试管法做RhD表型鉴定，抗E(20090105）、抗e(00700001）、抗C(20070113）和抗c(00800002）（
5、上海血液生物医药有限责任公司）。（2）基因组DNA制备：采用TIAN-GEN基因组DNA提取试剂盒，从乙二胺四乙酸抗凝的外周全血中制备基因组DNA，严格按照试剂说明书进行操作。（3)RhD的序列特异引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）法基因分型：对IAT确定为弱D或部分D的阳性标本进行RhD10个外显子的检测，采用10对针对RhD基因外显子及侧翼序列的PCR-SSP引物，特异扩增RhD的10个外显子（测序PCR），方法参照文献2。2、结果50例RhD阴性献血者标本经IAT、吸收放散试验和RhD基因分型检测，检测结果显示，50例RhD阴性献血者中检出弱D、Del表型共17例，占34%。其中弱D4
6、例，占8%;Del表型13例，占26%。RhD阴性33例，占66%，其中Exon1-10全缺失29例，Exon3-9全缺失4例。见表1。表150例RhD阴性献血者鉴定结果3、讨论全国临床检验操作规程中Rh血型鉴定，当献血者初筛检测为阴性时需进一步进行Rh阴性确认试验，以排除弱D，但是如果检测的是患者标本，则可不必再确认。弱D型鉴定采用的是试管法IAT,Del需通过更加敏感的吸收放散技术才能检测到。中国人RhD阴性群体中10%30%的个体是Del表型，这类表型的个体在受到D抗原免疫刺激时，几乎不产生应答3。在临床输血中弱D型个体输注RhD阳性红细胞后可产生抗D抗体，所以受血者（患者）为弱D型，作
7、Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者（献血者）为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者1。对血站已确认为RhD阴性的人群中，检出弱D、部分D、Del表型早已有报道，只是检出比例各方报道不同3。本研究50例确认试验为RhD阴性的血液中检出弱D、部分D比例、Del表型比例低于海南地区4，高于湖北5、云南6、安徽地区7。弱D、部分D、Del表型的检测在临床输血中具有比较重要的意义，弱D、部分D、Del表型只是红细胞表面D抗原数量或质量减少，但是红细胞表面仍然存在D抗原，仍具有一定的免疫原性。当Rh阴性受血者输注弱D、部分D、Del表型血液后，可能会刺激受血者产生抗D抗体；受血者再次
8、输注RhD阳性红细胞、弱D、部分D、Del表型血液时，可能会发生溶血性输血反应，或者导致女性受血者怀孕时流产、新生儿溶血病等，给患者带来输血安全隐患8。血站技术操作规程（2019版）规定，RhD阴性的结果应经过确认试验，但并没有指出确认试验应采用的方法9。由于血站检出技术和方法等原因，经过RhD阴性确认实验，仍然有一定比例的弱D、部分D、Del表型血液无法检出。对于一般的中心血站，使用抗C分型和吸收放散试验鉴定可操作性比较强，但还需要相关数据研究和技术规范的支持。本鉴定结果分析提示，由于试剂、操作、方法等原因，血站提供给临床的RhD阴性血液中仍有弱D、部分D和Del。参考文献：1中华人民共和国
9、国家卫生和计划生育委员会医政医管局.全国临床检验操作规程M.4版.北京:人民卫生出版社,2015.2李宏,宋宁,邓永福,等.四川地区汉族人群Rh(D)变异体分子机制研究J.中国输血杂志,2010,23(5):368-372.3邹文涛,何子毅.无偿献血者弱D型的检出J.临床输血与检验,2007,9(1):67-68.4叶健忠,杨向萍,蔡于旭,等.海南汉族RhD阴性个体RHD基因研究J.中国输血杂志,2005,18(2):97-100.5沈钢,章俊华,张浩,等.湖北汉族RhD阴性个体Rh表型及RHD基因多态性研究J.中国输血杂志,2007,20(4):304-306.6蔡玲君,丁权,陈文仙,等.云
10、南地区RhD阴性个体RHD基因研究J.中国输血杂志,2006,19(6):452-453.7吕蓉,刘忠,方勤,等.安徽地区RhD(-)无关供血者的血型调查J.中国输血杂志,2006,19(5):402-403.8林甲进,朱碎永,白植地.Rh弱DDel的检测及意义J.温州医学院学报,2008,38(4):361-362.9中华人民共和国国家卫生健康委员会.国家卫生健康委关于印发血站技术操作规程(2019版)的通知(国卫医函201998号)EB/OL.(2019-05-08)2019-11-28.祝晓琴,邓永福.RhD阴性献血者鉴定结果分析J.检验医学与临床,2020,17(16):2399-2400.
