电转酿酒酵母实验步骤

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电转酿酒酵母实验步骤(以含有单杂载体pAbAi整合后的Y1H菌株为例)1)将转化用酵母菌株的单菌落接种于100mlSD/-Ura培养基中,30过夜培养至OD600=1.3,时间大概23h;3)酵母菌液置于冰上10min,然后于44000g(1500r/min)离心收获培养细胞,将两管细胞置于一管,加入50ml冰冷的灭菌水重悬洗涤,重复两次。6)在离心后的酵母细胞中加入10ml冰冷的1mol/L山梨醇,离心。然后加入0.5ml冰冷的1mol/L山梨醇重悬。7)电转化:在无菌冰冷的微量离心管中加入40ul 酵母菌细胞和小于等于100ng 待转化的DNA(体积小于5ul),混匀。转移至冰冷的电转槽中,置于冰上5min,然后进行电击,1.5KV档,电击时间在5.0-5.4ms。8)立即往电击槽中加入500ul冰冷的1mol/L山梨醇,轻轻吹吸混匀,吸入收集管中。在收集管中加入适量液体筛选培养基,30摇床150RPM孵育1-2h。9)直接涂布在选择培养基平板上,于30培养3-6天,直到平板上出现菌落。注意:转AD的菌液分别涂于有抗生素和无抗生素的两个板子上,用以判断是否转化成功。计算滴度涂于无抗生素板子上,参考浓度10ul稀释至100ul或直接涂100ul。

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