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1、病毒大量制备和CsCl梯度离心纯化：1. 将293细胞铺于30-40个10cm dish ,至细胞长满，每块板加入合适 滴度的病毒（约107-10 8 pfu/ml ） 10此 感染细胞，待细胞全部病变后（4-7 天），每块板中加入约 500 口（150ul ） 10% Nonidet P 40（NP40）以裂解细胞。收集整个细胞裂解物，如果不是立即做CsCl纯化的话，可放在-80 C冰箱。2. 12,000 rpm 离心10 min ,弃细胞碎片，收集上清。每 100ml上清加 入 50 ml PEG8000 （20% PEG8000 , 2.5M NaCl ）,冰上 1 hr 沉淀病毒。3
2、. 12,000 rpm 离心上述混合物20 min ,弃上清，将沉淀物悬浮在 10 ml 密度为 1.10g/ml 的 CsCl 溶液中（溶剂为 20 mM Tris-Hcl ,pH 8.0 ）04oC 7,000 rpm离心5 min ,收集病毒悬浮液。4. CsCl梯度的制备，用滴管轻轻加入 2.0 ml的CsCl （密度1.40g/ml , 溶剂同上）。再加入3.0 ml密度为1.30 g/ml 的CsCl溶液。再加入5 ml的 病毒悬浮液。20,000 rpm ,室温离心2 hr。收集密度在1.30-1.40g/ml 之间 的病毒条带至透析袋中，透析袋用前用10 mM 的EDTA Na2煮沸10 min 。在透析缓冲液（将50g蔗糖，10ml 1M pH为8.0的Tris-HCl液，2ml 1M MgCl 2溶液定容至1,000 ml）中，4oC透析过夜，中间换一次透析液。收集 病毒，测定病毒滴度。三种密度的 CsCl溶液配制（溶于灭菌20 mM Tris中, pH8.0）, 4 c保存。密度(g/ml)(20 c)浓度(W/V)CsCl 量(g)终体积（ml）1 . 4056%7.84101 . 3031%4.03101 . 1012%1.3210欢迎下载，谢谢观看！资料仅供参考学习
