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1、Word文档下载后（可任意编辑） 猪口腔液在疫病监测上的应用进展猪口腔液在疫病监测上的应用进展 近年来，猪疫病病原监测将采纳猪口腔液采集新技术。采样技术将从传统的机体损伤性渐渐向非应激性采集方式转变。 以往病原监测采集的样品主要以血液、扁桃体、肺和淋巴结等为主。扁桃体和血液样品的采集需在猪活体上进行，采样难度大，易给猪群造成较大应激及不良反应，在实际采样工作中常遇到养殖场户不协作状况。而肺和淋巴结等组织往往需从屠宰场采集，样品难以精确反映本地猪群疫病管理的实际状况。而猪口腔液样品采集技术操作简易、本钱低廉，适合大面积推广，对猪只无损伤，更加符合动物福利原则。 所谓口腔液，即是指猪口腔中的唾液和
2、血清渗出液的混合液体，血清渗出液是通过口腔黏膜和口腔黏膜上的齿龈沟和毛细血管进入口腔。业已证明，口腔液具有广泛的生物学功能，口腔液样品既可用作抗体检测，又可用于PCR检测抗原，可替代血清样品，为猪群传染病监测提供有效的技术手段，口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒、经典猪瘟病毒、流感病毒、蓝耳病病毒、以及还有其他的一些病原体都可以采纳口腔液进行检测。虽然口腔液样品主要采自于断奶猪和生长育肥猪，但也适用于后备种猪、生产母猪和生产公猪。 1.猪口腔液采集方法 将100纯棉绳悬挂于猪栏的洁净区域，直径1.3cm的绳子用于保育猪口腔液采集，直径1.6cm的绳子则用于生长育肥猪和生产公母猪。绳子上端打结，并做好固定
3、。悬挂处应远离饲槽和猪排便区，悬挂高度应高于猪身但保证猪能接近和啃咬，任猪咀嚼，30min后收取棉绳，刮取和挤压上面的口腔液至塑料板或玻璃皿中，再将口腔液吸取至试管中备用，理论上至少能收集到4mL的采样量，但一般认为1mL为有效采集量。假如口腔液样品比较洁净，则无需再作处理；假如样品混有其它颗粒物，则低速离心10min即可。 2.口腔液检测的留意事项 (1)口腔液检测并非疫病诊断或检测标准中的程序，仅用于猪群中循环抗体或抗原的检测和评估。 (2)口腔液样品不要混样。 (3)棉绳吸收性最好，合成纤维绳则效果稍差。 (4)有的猪群第一次可能不太情愿啃咬绳子，可先将绳子供其玩弄，或在绳子上喷洒糖溶液
4、，一旦习惯养成，而后再采集就方便了。 (5)猪上午活动灵敏，因此宜于在该时间段采样，午后则可能花费时间较长。 (6)绳子的悬挂高度应与猪肩胛部平。 (7)猪有喜新厌旧的心理，已经使用的绳子不宜再用。 猪口腔液采集新技术一个样本可覆盖多猪只，可同时检测多种疫病病原，削减人力物力的耗费，大幅提高疫病检测效率，能够更加全面地把握猪群的整体状况。口腔液采集，方法简便，易学易用，速度快，应急小，费用低，不需要特地器材和特别的技巧训练，并可削减应激，改善动物福利，有助于猪群生长性能的提高，是评估猪群实时健康动态的良好工具。 - 北京中科基因技术有限公司系动物疫病检测独立试验室连锁机构，致力于打造动物健康管
5、理及安全畜产品生产生态圈。 公司以在全国通过CMA认证的数十家动物疫病检测诊断服务平台为技术支撑，为养殖企业提供疫病诊断、病原基因测序、免疫抗体水平评价及细菌耐药性和消毒效果评价等服务，为畜禽诊疗机构提供临床检验服务，为大学及科研机构提供科研外包服务，为各级动物疫病预防掌握中心提供免疫密度及免疫效果评价服务，为疫苗、兽药、饲料等生产企业提供临床试验及售后服务外包。 公司搭建执业兽医师注册平台，为执业兽医师提供注册与继续教育培训服务，组织高水平执业兽医师为养殖企业提供线上线下技术服务。同时搭建疫病诊断试验室联盟，为各成员试验室提供相关培训、疫病及技术资讯、试验室管理、耗材及标准化运营服务。 公司
6、始终奉行独立公正、专业高效的服务理念，努力提升我国兽医诊断及疫病防控水平，为动物健康管理及安全畜产品生产保驾护航。 猪口腔液在疫病监测上的应用进展 一、猪口腔液的介绍 猪口腔液指猪口腔中的唾液和血清渗出液组成的混合液体。唾液是由大小唾液腺大唾液腺包括腮腺、颌下腺和舌下腺；图1分泌的混合液体，无色无味近于中性pH6.67.1，其中水分约占99%，其余成分主要是黏液素、淀粉酶、溶菌酶、脂肪酶、富脯氨酸糖蛋白等。血清渗出液是通过口腔黏膜和口腔黏膜上的齿龈沟和毛细血管进入口腔的液体。口腔液具有广泛的生物学功能，口腔液样品可以用于抗体检测和PCR检测抗原，肯定程度上可替代血清样品，为监测猪群传染病提供一
7、种新的技术手段。 二、猪口腔液和猪血样作为检测样品的比较 使用口腔液的优势：1.采集方便、本钱低廉、效率高、可大量采样；二是采样方法简洁，采样人员经简洁培训即可，易学易用，可快速获取结果，适合国家性或区域性动物疫病铲除或净化计划；三是临床采样简洁，可行性强，既不会扰乱猪场日常生产性支配和引发动物不良应激，且可连续采样，尤其适用于富含脂肪组织和生性凶狠的生产公猪群。第四，更符合动物福利原则。 三、猪口腔液可作为评估猪应激状况和健康状况的的生物标记物 口腔液是讨论猪应激的最正确液体样品，其中的皮质醇可以作为评估猪应激的标记物。猪群运输、不同环境、不同饲养条件如不同饲养密度、不同日粮组成、打耳标、采
8、血等下，猪口腔液中皮质醇不同。另外，口腔液中IgA、α-淀粉酶活性、IL-18、嗜铬粒蛋白A和急性期蛋白APP，包括C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A等含量增减改变，可以用于猪群应激压力的评估。 Gutierrez等通过检测APP、结合珠蛋白、C反应蛋白和血清淀粉样蛋白A的含量，确定了猪繁殖和呼吸综合征PRRS健康猪群和患病猪群的的临界值。Gutierrez等通过对健康猪群和发病猪群口腔液蛋白质组学的比较分析发觉，发病猪群口腔液中的脂蛋白、脂蛋白、双头胃蛋白酶抑制剂、腺甙脱氨酶、结合珠蛋白、S100-A12、S100-A8、S100-A9和α-淀粉酶的含量显著高于健康猪群。
9、 四、猪口腔液的采集 因为猪舍环境条件和检测目标等的不同，猪口腔液的采集方法会有肯定差异，同时采集方法、器械、地点和时间等会影响口腔液的组成成分。在此推举一种猪口腔液的采集方法：将直径1.3cm的全棉绳用于保育猪、直径1.6cm的绳子用于生长育肥猪和生产公母猪口腔液采集，用于采集育成猪口腔液的工具如图2所示，悬挂处应远离饲槽和猪排便区。棉绳上端固定，下垂高度与猪只的肩关节齐平图3，任猪咀嚼，30min后收取棉绳图4，刮取和挤压口腔液至自封袋图5，然后装入EP管或其它容器。一般认为1mL为有效采集量。 五、猪口腔液采集留意事项 (1)口腔液检测并非疫病诊断或检测标准程序，仅用于猪群中循环抗体或病
10、原的检测和评估。 (2)单独处理样品，一旦发觉抗体或病原，方便回溯讨论。 (3)棉绳相较于其它材质绳吸收性最好。 (4)培育猪群啃咬绳子的习惯，方便后续采集。 (5)宜在猪群较为活跃的上午采集样品。 (6)绳子的悬挂高度应与猪肩胛部齐平。 (7)猪有喜新厌旧的心理，已经使用的绳子不宜再用。 六、猪口腔液在猪疾病诊断方面的应用 在兽医领域，1905年，前苏联最早将马的口腔液用于疾病检测BlakeandTobin,1986。在猪，1976年Corthier首先将猪口腔液用于猪瘟的检测。近十几年来，国内外动物医学界对猪口腔液的讨论报道日渐增多和深化，将为猪口腔液在分析、检测等方面的推广应用提供良好的
11、前景。 病毒：猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒、A型流感病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、细环病毒1型和2型等的抗体或抗原。 细菌或支原体：猪大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪空肠弯曲菌、链球菌、螺旋菌、丹毒丝菌属、胞内劳森氏菌、猪鼻支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体等的抗体或抗原。 猪口腔液可以用于早期诊断，某些猪传染病的病毒血症在感染猪出现临床症状前已经存在于猪口腔液中，因此可以比血清样品更早得到结果。 口腔液采集样品更方便，如螺旋菌引起的胃溃疡，通常要尸检后方能观看到病变，但可以直接从口腔
12、液中检测到病原。 可以通过口腔液检测一些疫苗的有效性，并可用于对口腔液中病原的分子进化特征进行分析。 猪口腔液在疫病监测上的应用进展 猪口腔液(以下简称口液),是指猪口腔中的唾液和血清渗出液的混合液体,具有广泛的生物学功能,既可用作抗体检测,又可用于检测多种病原体,如口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型等。近年来,国内外动物医学界对猪口液的讨论日渐增多和深化,口液样本的潜在诊断价值正在被逐步开发利用。 1口液采集方法 在样品采集前应禁食禁水6h,可在早上饲喂前把棉质绳子直接固定在围栏或支架上,绳子的两端与猪的肩胛骨同高,远离水或饲料吸引猪来咀嚼。悬
13、挂时间20min左右,待绳子经过栏舍内全部猪咀嚼后,把绳子放到封口袋内,通过在袋子里拉或挤压绳子,让液体在袋子底部聚集,随后将封口袋一角剪破,将口液收集到15mL离心管内。收集23mL口液即可满足检测要求,样品收集后应马上冷藏运输到试验室开展检测。不建议对口液进行过滤除菌、添加抗生素等前处理,可10008000r/min离心或不进行任何处理即可开展检测。口液样品4可以冷藏至少12d,也可在-20或更低温度冻存,冻存对抗体检测影响较小。 在规模为10002000头猪或4050个围栏的棚舍里,放置10根绳子即可;30头及以下的猪圈1根绳子即可。在较大的猪圈(100头以上)内,应在不同的区域内悬挂多
14、根绳子,以吸引不同的猪群。因口液取样引发猪应激很小,采集的最正确频次为每周1次,频次可依据场内疫病发生风险和疫病监测实际状况进行适当调整。 2口液样品优势 目前猪场多通过血液检测疫病的抗体和病原的方法开展猪群免疫监测和疫病诊断,但采血引发猪的应激较大,采样耗时费劲,并存在肯定人员危急(特殊是进行种公猪采样时)。采血监测不能满足疫病净化监测的大样本量和频繁采样,且由于很多病原菌(毒)血症时间较短,也不适用于病原检测。 当前,猪群疫病铲除和净化已经全面展开,需要监测大量样品的同时,不同的监测阶段和监测项目对检测样品的要求也不一样。新型的无创样本采集方法具备宽阔的市场前景和巨大的有用价值。口液样品采
15、集和监测技术具备样本采集方便,对机体造成的应激小,可检测内容丰富,样本内的成分相对稳定、蛋白和脂类含量低等特点。猪对四周的环境充满好奇和兴趣,喜爱咀嚼,利于口液样品的采集。部分猪场对于口液采集会不会造成疫病传播存在疑虑,因为集体饲养的猪始终在共用喂食器、饮水器、生活区等,所以口液采集并不会额外造成疫病散播。采集的口液样品还有一个保存优势,就是可以直接冷冻保存,口液中的各种酶类和抗菌物质可以使样品保存更长时间。可以使样品保存更长时间。 总而言之,猪口液的采样和检测为监测猪群传染病提供了一种新型的有效技术手段,适于大样本量频繁采样和病原筛查的活体采样及监测。 3留意事项 3.1绳子的大小和类型 纯棉质的三股绳最适合用于检测。绳子直径至少到达1.2cm,以确保收集到足够的样本量。另外,绳子的材质和大小要统一,不能用不同绳
