亚硝酸盐氮测定一格里斯试剂分光光度法1原理亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用，可生成不稳定的化合物，随即与Q ■荼胺作用，生成一种红色偶氮化合物，反应如下:+ NiNOi + 2CH>HSO,H十 CH.(()ONa+2HQCHjCOO - N ■ N NH：d 心 —-N - +CH.COOHSO>H '（红色）此偶氮化合物在524nm处有最人吸收波长，因此可以通过此反 应产牛红色偶氮化合物的吸光值计算出NO?「的浓度，从而计算 出亚硝态氮浓度此方法的有效范围最大值为0.5mg/Lo2实验用品2」仪器：100ml容量瓶、10ml容量瓶、试管若干、最大量程分别为lml、0.2ml的移液枪一支、分光光度计、水浴锅；2.2药品：对氨基代苯磺酸、冰醋酸、蔡胺、亚硝酸钠；2.3试剂配制（1）格里斯试剂A. 对氨基代苯磺酸试剂:称取对氨基苯磺酸0.5 g,溶于30 mL冰醋酸和100 mL蒸憾水的混合液中（过滤避光保存一 个月内可用）；B. a■蔡胺试剂:称取0.1 g a■蔡胺试剂，溶解于100 mL热蒸憾 水中，冷却后加入30 mL冰醋酸（过滤避光保存一个星期内 可）；临用前将A和B两溶液等量混合。
2） NaNO2标准溶液（0.01 mg/mL）：称取0.0150g分析纯亚硝 酸钠溶于水中，定容至100 mL；吸取ImL此溶液，再稀释 定容至10 mL,即为标准溶液3实验步骤3.1标准曲线取7支10 ml比色管，分别按表加入试剂，在波长524 nm处以蒸憾水作参比，依次测定吸光度A,各值减去空白试验（即0号管）绘制标准曲线编号0123456NaNO2标准溶液（mL）00.0250.050.10.150.20.25加蒸馆水至5mL浓度（mg/L）00.050」0.20.30.40.5格里斯试剂（mL）0.20.20.20.20.20.20.2摇匀，沸水浴加热lmin,冷却至室温吸光值a5240.0020.0390.0690.1310.1920.2410.311A=A524・A524（0）—0.0370.0670.1290.1900.2390.309以编号1〜6的数据（红色字体的数据）作标准曲线，横坐标为配制成溶液亚硝酸盐氮浓度（mg/L）,纵坐标为A； 3.2样品测定取0.4ml水样（必要时可以用稀释后水样代替，记下稀释的 倍数D）用蒸僻水稀释至5ml后，加入0.2ml格里斯试剂，。
在 波长524 nm处以蒸憾水作参比，依次测定吸光度A524,各值减 去空白试验（即标准曲线0号管的吸光值）即为校正值A（此全 过程应与标准曲线同时操作）；编号ABCDEF• ••水样/ml0.40.40.40.40.40.4• ••加蒸镭水至5mL格里斯试剂/ml0.20.20.20.20.20.2• • •摇匀，沸水浴加热lmim冷却至室温；A524• • •A=As24-A524(0)• • •浓度/ (mg/L)• • •3.3水中亚硝酸盐氮浓度按下式计算:PN (NO/) = [5 X (A-a) /(b X V) ] XD式中:PN(NO/)——原水样中亚硝酸盐氮浓度,mg/L,以N计;A 试样校止后的吸光值；b——标准曲线的斜率；a——标准曲线的截距；V 所取试样的体积，ml；D——稀释倍数(水样未经稀释时此值为1)；4注意事项该方法最大有效范围比起原样品中亚硝酸盐氮浓度可能最大值有相当大差距，注意稀释但又不可过量稀释，避免测得的吸光值过小以致不准确；出于对所用蒸憾水可能含有亚硝酸根的缘故，会令标准曲线测试样及水样的测得值大于实际值，因此以0号管消去去蒸憎水可能含有亚硝酸根所造成的误差，所以标准曲线不过原点。