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1、 楤木皂苷A在大鼠体内的组织分布研究 郭东艳翟秉涛吕杨史亚军范妤王露王媚摘要楤木皂苷A为太白楤木中的主要活性成分之一。该文通过建立SD大鼠主要脏器中楤木皂苷A的LCMS/MS分析方法，同时口服灌胃楤木皂苷A 50 mgkg-1，测定大鼠主要脏器（心、肝、脾、肺、肾、脑）中的楤木皂苷A含量，探讨体内的组织分布特征。结果显示楤木皂苷A在SD大鼠主要脏器中的方法学考察符合要求，口服灌胃楤木皂苷A 50 mgkg-1，在心、肝、脾、肺、肾、脑组织均有分布且在1 h或2 h 时达到最大值。在给药后不同时间点楤木皂苷A的组织分布情况不同：给药20 min各组织含量：肝心脾肺肾脑；给药1 h各组织含量：肝脾
2、肾肺心脑；给药2 h各组织含量：肝肾心脾肺脑；给药4 h各组织含量：肾肝脾心肺脑；给药8 h各组织含量：脾心肝肾肺脑。提示楤木皂苷A主要分布于肝组织，这也与太白楤木常用于治疗肝脏疾病具有一定的相关性。另外，楤木皂苷A在脑组织中虽含量低但有明显分布，提示药物可能会透过血脑屏障，也为楤木皂苷A在脑组织的研究提供了依据。关键词楤木皂苷A； 组织分布； HPLCMS/MSAbstractAraloside A is one of the main active ingredients of Aralia taibaiensis In this study， HPLCMS/MS analysis met
3、hod of araloside A in the main organs of SD rats was established At the same time， the content of araloside A in the main organs （heart， liver， spleen， lung， kidney， brain） after oral administration with araloside A （50 mgkg-1） were determined to explore the tissue distribution characteristics of ar
4、aloside A in vivo The results showed that the methodological study of araloside A in the main organs of SD rats met the requirements， araloside A distributed in heart， liver， spleen， lung， kidney and brain tissues reached peak at 1 h or 2 h after oral administration with 50 mgkg-1The distributions o
5、f araloside A at different time points after administration were distinct as follows： the content of araloside A at 20 min：liverheartspleenlungkidneybrain； the content of araloside A at 1 h： liverspleenkidneylungheartbrain； the content of araloside A at 2 h： liverkidneyheartspleenlungbrain； the cont
6、ent of araloside A at 4 h： kidneyliverspleenheartlungbrain； the content of araloside A at 8 h： spleenheartliverkidneylungbrain Therefore， araloside A was mainly distributed in liver tissue， which had a certain correlation with the common use of Aralia taibaiensis in the treatment of hepatic disease
7、In addition， araloside A shows a low content but an obvious distribution in brain tissues， which indicates that the drug can pass through bloodbrain barrier， and provides the basis for the study of araloside A in brain tissueKey wordsaraloside A； tissue distribution； HPLCMS/MS楤木皂苷A（araloside A）為楤木属植
8、物太白楤木Aralia taibaiensis的主要活性成分之一，含量约占太白楤木药材质量的12%，其化学结构见图1。具有抗溃疡、抗肿瘤、促纤溶、降血糖、抑制肾素活性等药理作用15。1961年，楤木皂苷A首次被前苏联学者Kochetkov N K等6从辽东楤木中分离得到，并运用化学法初步确定其结构。随后的几十年，有关楤木皂苷A的研究报道主要集中在药效方面，而相关的药代动力学研究仅有2篇报道，1篇是Iskenderov G B等71991年发表，而另1篇Qi D等8以楤木皂苷A作为指标成分之一，对竹节参提取物进行药动学研究。众所周知，1个药物能否发挥药效，在一定程度上是由胃肠道的吸收和靶器官的浓
9、度决定。药物口服吸收进入机体后，将通过循环系统转运至机体的各组织脏器中，药物分布的特征不仅与机体各部位的生理特征有关，而且与组织亲和力，化合物自身的理化因素等密切相关。这将使药物在体内各组织分布产生差异性，从而影响药物的治疗效果和药物的蓄积以及毒副作用9。课题组前期已对楤木皂苷A的体内吸收进行了相关研究。本文拟在前期研究基础上，探讨楤木皂苷A的组织分布特征，了解其在体内各主要器官的浓度，为药物的研究、开发及药物作用至靶器官或更理想的靶部位提供参考。endprint1材料与方法11仪器与试剂岛津Nexera XR LC20AD 高效液相色谱仪（日本Shimadzu；Dgu20A3RDegassi
10、ng Unit；SIL20AXRAutosampler；CTO20A Prominence Column Oven）；AB Sciex Qtrap 4500型质谱仪（美国AB Sciex公司）；GeneSpeed X1型微量离心机（香港基因有限公司）；BT25s型电子分析天平（天美控股有限公司）；miVac样品浓缩仪（英国GeneVac公司）。楤木皂苷A（批号150916，纯度98%，成都普菲德生物技术有限公司 ）；川续断皂苷（批号160211，纯度98%，成都普菲德生物技术有限公司）；甲醇和乙腈（Adamas Reagent，色谱级）。健康的SD大鼠30只，雌雄各半，体质量（23020） g
11、，购于第四军医大学动物试验中心，动物合格号SCXK（军）20120007。12色谱质谱条件121色谱条件色谱柱采用Hypurity C18（46 mm150 mm，5 m）；柱温35 ，流速08 mLmin-1，进样量5 L，流动相A 01%甲酸水，B为乙腈，洗脱程序：06 min，35%50% B；68 min，35% B；在203 nm波长下测定。122质谱检测条件离子源采用ESI源；检测方式为负离子检测；采用MRM方式进行扫描；离子化电压-4 500 V，气帘气35 psi（1 psi=6895 kPa），离子源温度550 ，喷撞气Medium，喷雾气150 psi，辅助加热气250 p
12、si。楤木皂苷A和内标的离子对及质谱参数，见表1。13样品溶液的配制楤木皂苷A储备液：精密称量楤木皂苷A 1 mg，用50%甲醇溶解，制成质量浓度约为1 000 mgL-1的储备液。楤木皂苷A工作液：精密量取储备液5，10，25，50，100，250，500，1 000 L于离心管中，加入50%甲醇配制成不同系列浓度工作液，使得楤木皂苷A的质量浓度为501万mgL-1。川续断皂苷储配液：精密称量内标川续断皂苷 05 mg，用50%甲醇溶解，制成质量浓度约为50 mgL-1的儲备液。川续断皂苷工作液：精密量取储备液适量于离心管中，加入50%甲醇，制成质量浓度约为2 mgL-1的工作液。质量控制样
13、品：精密量取楤木皂苷A 10 L，添加川续断皂苷工作液10 L于15 mL离心管内经浓缩仪干燥，再添加200 L空白组织液，制得质量浓度约为5，500，4 000 mgL-1的质量控制溶液。14组织样品采集1012清洁级雌雄各半的SD大鼠30只，给药前15 h禁食不禁水。以楤木皂苷A 50 mgkg-1灌胃给药（给药体积为10 mLkg-1），给药后分别在033，1，2，4，8 h处死，立即解剖采集心、肺、肝、脾、肾、脑；生理盐水洗净，置于-20 冷冻保存。15组织样品的处理1315精密称取各组织05 g，用生理盐水洗净，2倍量蒸馏水匀浆，从中取200 L组织液，添加10 L的川续断皂苷，再添
14、加乙腈600 L涡旋2 min，13 000 rmin-1离心10 min后吸上清经浓缩仪干燥，200 L色谱甲醇复溶残渣后过022 m滤膜，吸5 L进样分析。16数据处理采用Microsoft office Excel软件进行数据统计和处理。数据测定值采用均值标准差表示。2结果21方法学考察1618211专属性取空白肝脏、空白肝脏组织中添加楤木皂苷A（50 gL-1）和内标川续断皂苷（2 mgL-1），实测肝脏组织样品（口服楤木皂苷A 2 h），按相应方法处理后进行分析，考察方法的特异性。结果表明，空白肝脏组织中没有物质干扰楤木皂苷A及川续断皂苷的测定，表明该方法的特异性良好，见图2。212
15、线性范围与定量下限精密吸取一定量的楤木皂苷A溶液，加入10 L内标川续断皂苷溶液和200 L空白组织液，配制成5，10，50，100，500，1 000，5 000 gL-1的楤木皂苷A标准添加组织样品，处理后进行加权（1/X2）计算，见表2。最低检测限（LLOD）的S/N3；定量下限（LLOQ）的S/N10。取LLOQ浓度质控样品，按相应方法求出楤木皂苷A的浓度。213精密度与准确度取3个不同浓度质控溶液，按相应方法求出楤木皂苷A的浓度。于1 d内测6次，3 d测3批，计算批内、批间 RSD（%）和RE（%），见表3。214基质效应与提取回收率取空白组织液200 L，先加入楤木皂苷A，再加入600 L乙腈，涡旋离心后吸上清用浓缩仪干燥，取200 L甲醇复溶残渣后过022 m滤膜，吸5 L进行分析，所得峰A 空白肝组织匀浆液；B空白肝组织匀浆液加对照品及内标；C大鼠口服灌胃2 h后肝组织匀浆液；1楤木皂苷A；2川续断皂苷。面积记为A。取空白组织液200 L，先加入600 L乙腈，涡旋离心后吸上清用浓缩仪干燥，再加入一定量楤木皂苷A，涡旋混匀2 min后过022 m滤膜，吸5 L进行分析得数据记为B。取用流动相配制的楤木皂苷A 50 L，混合均匀，吸5 L进行分析得数据记为C。楤木皂苷A的提取回收率=A/B100%
