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1、正交试验法优选复方三七活血颗粒中药材的提取工艺研究张述耀| （汕头大学医学院附属肿瘤医院药剂科，汕头市515041）摘要目的:优选复方三七活血颗粒中药材的最佳提取丁艺。方法：采用正交试验法，以提取 液中三七总皂昔的含量以及总固体得率为指标，综合评分优选药材的提取工艺。结果:药材 较优的提取工艺为加水12倍，提取3次，每次2h。结论：优选的提取工艺各活性部位提取 率高，操作简便，适用于生产。关键词：复方三七活血颗粒；正交试验法；提取工艺；三七总皂昔Study on the Extraction Process of Herbs in CompoundSanqi Huoxue Granules b
2、y Orthogonal DesignZHANG Shu-yao（pharmaceutical preparation section of Affiliated Cancer hospital of Medical College of Shantou University, Shantou, Guangdong 515041）Abstract Objective: The technology of optimal extraction for compound sanqi huoxue granules is investigated in this study. Methods: Or
3、thogonal test was employed for selecting the optimum of extraction technology by colligation score and the indexes of the contents of panax notoginseng saponins, total solid matters in water extraction. Results:Twelve volumes of water, extracting 3 times with two hours for each time was considered t
4、he optimum extraction technology of herbs. Conclusion: The considerable extraction rate of active components in the drugs is achieved by applying the selected technology, and the simple method is fit for production.Key words: compound sanqi huoxue granules; orthogonal design; extraction technology;
5、panax notoginseng saponins复方三七活血颗粒由三七、骨碎补、红花、续断等13味药材组方而成，原 处方收载于部颁标准三七活血丸中，具有活血、通络、散瘀的功效，临床上广泛 用于铁打损伤、骨折初期肿胀严重者的治疗，具有疗效可靠、不良反应少、无须 联合用药的优点。本处方药味多，成分复杂，原制剂工艺简单，在剂型方面，以 每丸重9g的大蜜丸用药，不仅服药量大，病人耐受性差，而且挥发性成分易损 失、质量难以控制。本实验以最大限度地提取药材中的有效成分，避免有效成分 的分解流失和无效成分的溶出为原则，根据处方中有效成分的理化性质和药理作 用，以三七的有效成分人参皂 Rgj人参皂昔Rbi
6、、三七皂昔&的含量之和（以 下简称I）及总固体得率为指标，采用正交试验法，进行三七活血颗粒中药材提 取工艺的研究，以减小剂量、创新剂型、提高临床疗效、改善病人服药顺应性， 并为生产提供依据。1仪器与试药WATERS2695/2996型高效液相色谱仪（美国）；所有药材均购自中山市中智药业有限公司。人参皂昔Rbl （批 号:110704-200318）,人参皂昔 Rgl （批号:110706-200319）,三七皂昔 R1 （批 号：110736200321）（均购自中国药品生物制品检定所）。乙腊、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1含量测定方法的建立2.1.1色谱条件色谱柱Kro
7、masil Ci8(250 mm x4.6 mm, 5|im)；以乙月青为流动相A,以水为流 动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按三七皂昔 Ri峰计算不低于4000。表1流动相的比例Tab.l proportion to mobile phase时间(分钟)流动相A (%)流动相B (%)015188215 60183582-652.1.2线性关系考察精密称取人参皂 Rgi人参皂昔Rbi、三七皂昔对照品适量，加甲醇制 成每1ml含人参皂昔Rgil. 112mg、人参皂 Rbjl. 214 mg三七皂昔R。601 mg 的混合溶液，即得对照品溶液。精密吸取上述对照
8、品溶液5|11、10|11、15|11、20|11、 25日1,注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积，以人参皂昔Rgi、人参皂 昔Rbi、三七皂昔Ri进样量微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线 性回归，得回归方程为人参皂 Rgi： y=274124.43x-81798.17(r=0.9991),线性范 围：5.56院27.8曲;人参皂#Rbi： y=216225,26x-125245.55(r=0.9993)-线性范 围：6.07|ig30.35|ig；三七皂 Ri： y=239769.46x-38788.28(r=0.9998),线性范 围：3.005|ig15.025|igo
9、2.1.3供试品溶液的制备按处方量称取药材提取，提取液浓缩定容至2000ml容量瓶中。精密移取提 取液5mL加用水饱和的正下醇溶液10ml振摇15分钟，取上清液，加3倍量以 正丁醉饱和的水溶液，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残 渣加甲醇溶解，定容至5ml,作为供试品溶液。2.1.4空白溶液的制备按处方量称取除三七外的其余药材进行提取，按“2.1.3”项下制备空白供试 品溶液。2.1.5含量测定照中国药典2005年版一部附录VI项高效液相色谱法测定。分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各20日1,注人液相色谱仪，测定，即得。见图1。ABC图1高效液相色谱图A对照品；B样品；C阴
10、性样品；Fig 1 HPLCA. Reference substance; B. Sample; C. Negative Sample;2.2正交试验设计与结果2.2.1正交试验设计根据方中药物的性质、现代药理学研究结果和中国药典中三七药材的质量控 制指标，以测定人参皂昔Rgi、人参皂昔R0、三七皂昔Ri的含量和总固体 得率为指标，用正交试验优选处方中药材的提取工艺条件。根据预试验结果，选 取影响提取效果的因素和水平，试验方案见表2： 表2 实验因素水平表水平因素加水量（倍）A提取时间（h） B提取次数（次）C1611291.5231223Tab. 2 Factors and levels o
11、f experiments2.2.2样品溶液的制备：按处方量称取三七等13味药材，按L9 （34）试验列号各 条件分别回流提取、滤过，并浓缩定容到2000ml,放置备用。2.2.3总固体得率的测定：精密量取各提取液100ml置已恒重的蒸发皿内，水浴 蒸干，置105C烘箱中，干燥3h,取出置干燥器中冷却0.5h,称重，置105C烘 箱中，干燥lh,至恒重，计算总固体得率。2.2.4含量测定：按“2.1”项下测定供试品溶液中三七总皂昔（I）的含量。2.2.5试验数据见表3,方差分析见表4。表3正交试验结果Tab.3Results of orthogonal design试验号2列号34试验结果因素
12、总固体I的含量（g）综合得分ABcD得率（）1111110.480.7442.92122216.540.9059.13133320.771.5888.64212317.461.0464.65223121.731.7495.56231212.791.3767.27313218.161.8893.48321312.621.5773.39332120.311.6289.1U63.53366.96761.13375.833Hj75.76775.96770.93373.2339文力=673.7IHj85.26781.63392.50075.500CT=50430.19Rj21.73414.66631.3
13、672.600注：综合评分=（总固体得率/最大总固体得率）X100X0. 4+ （ I的含量/最大 I 的含量）X100X0. 6表4方差分析结果Tab.4 Results of analysis of variance方差来源离均差平方和自由度F值F临界值显著性检验A712.242259. 30919. 000P0. 05B328. 222227. 33119. 000P0. 05C1545. 0292128.65619. 000PABO综合分析结果，选择加水量 为12倍量，提取3次，每次2h。所以确定药材较优的提取工艺条件为A3B3C3。 2.2.7验证实验：分别按处方量称取药材按较优工艺
14、A3B3C3提取，并测定三七总 皂昔的含量和总固体得率。经验证，此工艺能提取出的人参皂昔Rgi、人参皂昔 Rbi、三七皂昔Ri的含量之和约是1.889g,含量达11.2%。说明此提取工艺合理 可行、稳定。3讨论3.1三七中所含皂昔类成分为其主要活性成分，包括三七皂昔Ri、R2,人参皂 昔Rbi、Rd、Rgi等。此类成分溶于甲醇、乙醇和水。本实验是把大蜜丸剂改剂 型为颗粒剂，颗粒剂溶于水后，提高生物利用度，所以本实验采用水作为溶剂提 取药材，以尽可能地提出水溶性成分，以利于制剂成型的需要。3.2中药提取物的总固体是其发挥疗效的物质基础，所以本实验以其作为考察提 取工艺优劣的一个指标。3.3本实验通过系统的研究三七活血颗粒中药材的提取工艺，建立了操作简捷、 合理的提取工艺，这为三七活血颗粒提供一种生产周期短、生产成本较低、操作 简便、且无需增加企业设备投资的工艺参考。参考文献：1 张湘杰，何永恒.花椒、延胡索、没药、三七4味中药止痛作用的药理学研究进展J.中 国中医药现
