PCDNA3.1载体的构建

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1、 PCDNA3.1-CST6载体的构建1.内容： PCDNA3.1-CST6载体的构建 2.技术路线与方法3.结果 目 录1. 1.双酶切质粒双酶切质粒PCDNA3.1-PCDNA3.1-双粘载体双粘载体技术路线：技术路线：摇菌 提质粒分步酶切Hind酶切Hind BamH同步双酶切1.5 琼脂糖电泳清洁胶回收水连接转化涂板结果全质粒组克隆长满，水连接组克隆21个，需重新双酶切3个克隆BamH酶切清洁2次同步双酶切2. 2. 构建构建PCDNA3.1-CST6PCDNA3.1-CST6载体载体 双酶切双酶切CST6-PUC57CST6-PUC57电泳胶回收电泳胶回收CST6CST6PCDNA3

2、.1PCDNA3.1连接连接转化涂板转化涂板挑克隆挑克隆8 8个画梅花板个画梅花板只有3,7长出接种环取菌接种环取菌PCRPCR 菌液菌液PCRPCR摇菌摇菌提质粒双酶切鉴定提质粒双酶切鉴定送生工测序送生工测序全质粒Hind单切清洁物BamH单切清洁物同步双酶切5000MPCDNA3.1的酶切电泳 2013-5-212000MCST6-PUC57双酶切胶回收CST6CST6:468bpCST6-PUC57双酶切电泳 2013-5-30梅花板挑菌PCR,CST6M3377水2013-6-2左侧3,7为10XKBuffer,右侧3,7为2XGCBuffer3377水水PCR-cts6PCR-cts6结果失败：原因分析，体系比例？PCR仪使用？2013-06-04梅花板摇菌PCRMMPCR-CTS6（2013-6-3）1 12332水水442013-06-04梅花板摇菌PCR失败后重复1234分别为6月4日的菌液和6月3日菌苔的3和7左侧1-4为10XKBuffer,右侧1-4为2XGCBufferPCDNA3.1-CST6双酶切2000M3377