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1、 荧光共振能量转移体系的均相免疫分析对前列腺癌诊断运用价值初探 胡丹青 刘军 杨爱平 杨国绘 杨文娟 雷和月 全建军 范祎【摘要】目的：初步探索荧光共振能量转移体系（FRET）的均相免疫分析对前列腺癌诊断运用价值。方法：选择2013年5月至2014年9月我院收治的182例前列腺疾病患者，其中有31例患者为前列腺癌（PCa），151例患者为前列腺增生（BPH）。选择同期在我院进行健康体检的122例男性健康人群。采取FRET的均相免疫分析法对游离前列腺特异抗原（fPSA）和总前列腺特异抗原（tPSA）指标进行测定。分别观察三组人群的fPSA、tPSA、f/t PSA三项指标。依据PCa患者检测的T
2、PSA值，采用TPSA10g/L三组指标，将其患者分为A、B、C组，从中对其三组之间的fPSA、tPSA、f/t PSA三项指标进行比较。当TPSA0.05）。前列腺癌患者和正常人群tPSA0.05）。结论：采用FRET的均相免疫分析法对fPSA和tPSA指标进行检测，能够准确、快速的提供有效的临床依据，在前列腺癌诊断中具有较高的诊断价值，值得广泛推广使用。【关键词】荧光共振能量转移；均相免疫分析；前列腺癌R697+.3【文献标志码】A前列腺癌（PCa）在男性中是一种常见的恶性肿瘤，最近几年来 ，前列腺癌在我国以上升的趋势呈现。早期筛选与诊断前列腺癌主要是以直肠指诊和检测前列腺特异抗原为主，但
3、是最终的确诊需要以活检组织的病理结果为主1，2。前列腺特异抗原（PSA）是一种肿瘤标志物，其在诊断前列腺癌中具有一定的临床价值，但是PSA是器官的特异性抗原，并不是前列腺癌的特异，比如前列腺炎、良性前列腺增生患者中的血清PSA也可能会升高3。虽然前列腺组织穿刺采取活检方式能够使诊断的可靠性提高，但是创伤性较大，对大部分患者而言是难以接受的。为了提高血清检测在诊断前列腺癌中的准确率，因此具有高敏感性的免疫分析在诊断前列腺癌中成为了一种有力的工具。本文就荧光共振能量转移体系（FRET）的均相免疫分析对前列腺癌诊断运用价值进行初步探讨。现报道如下。1资料与方法1.1临床资料选择2013年5月至201
4、4年9月我院收治的182例前列腺疾病患者，纳入标准：（1）均得到了手术后的病理证实或者前列腺穿刺活检的证实；（2）患者愿意配合治疗。排除标准：（1）患者存在意识障碍；（2）存在肝肾等重大器官疾病。其中有31例患者为PCa，151例患者为前列腺增生（BPH）。临床上将依总前列腺特异性抗原（tPSA）范围410 g/L内确诊为灰色区域，在诊断前列腺良、恶性疾病中存在一定的困难，为了研究FRET的均相免疫分析在诊断前列腺癌中的价值，为此本研究依据PCa患者检测的tPSA值，根据tPSA10g/L，将其患者分为A、B、C三组进行研究。整个研究均在患者知情同意下进行，并经我院伦理委员会批准实施。选择同期
5、在我院进行健康体检的122例男性健康人群作为对照人群。1.2方法采取FRET的均相免疫分析法对游离前列腺特异抗原（fPSA）和总前列腺特异抗原（tPSA）指标进行测定：于清晨抽取3mL的空腹静脉血，对血清进行分离待测。分析仪器由天津港东公司提供的型号为WGY-10的荧光分光光度计的均相免疫分析仪，其fPSA与tPSA分析试剂和该设备的的试剂盒一致，均按照操作说明书进行。1.3观察指标分别观察三组人群的游离前列腺特异性抗原（fPSA）、tPSA、f/t PSA三项指标。比较A、B、C三组患者的fPSA、tPSA、f/t PSA三项指标。当tPSA1.4统计学处理本次实验数据处理选择spss11.
6、5软件包进行，用（s）来表示计量资料，对计量资料进行t检验，以P0.05表明差异具有统计学意义。2结果2.1三组人群的血清三项指标比较3讨论伴随着我国前列腺患者人群的增加，为提高患者的生存质量和预后，在早期对前列腺患者进行有效的诊断显得颇为关键。前列腺癌主要是由于人类的前列腺上皮中产生的丝氨酸蛋白酶，最初是由相关研究者在人类精浆中发现，进而将其称之为r-精浆蛋白，随着医学技术的不断发展，相关研究者依据前列腺的上皮细胞，从中提纯和分离出完全一样的糖蛋白，并且从而证实其作为前列腺特异度，由此将其称之为前列腺特异性抗原4，5。具有34KD的抗原分子量，在前列腺组织中主要表现为高浓度，发挥着液化精液的
7、功效，为此，前列腺特异性抗原具备较高的组织特异性。PSA在血清当中以不同形式的分子存在：（1）fPSA主要表现为自由形式的分子；（2）PSA-ACT主要是由1-抗糜蛋白酶而合成的复合物；（3）PSA-2m主要是根据2-巨球蛋白酶而形成的复合物，PSA在血液当中多数是和1-抗糜蛋白酶的结合形式存在，因此多数的分子形式是PSA-ACT，少数为PSA-2m与fPSA6，7。PSA-2m并不具备免疫活性，为此现有的PSA难以检测，目前PSA检测的为fPSA以及ACT结合而成的CPSA，然而CPSA与fPSA之和为血液TPSA。通常情况之下，导管腔与前列腺腺泡和血液系统有着显著的组织屏障，因此tPSA在
8、血液中具有极低的含量并且相对较为稳定，一旦有前列腺疾病出现而破坏此种屏障时，会有大量的tPSA注入到血液中，因此将tPSA作为当前检测前列腺癌的肿瘤标志物8，9。但是tPSA的特异性仅存在于前列腺组织中，而特异性难以出现在前列腺癌中，对于前列腺炎以及前列腺增生等良性疾病的患者，也会有tPSA升高，尤其是tPSA值在410g/L时，在此范围内前列腺癌和前列腺增生患者的血清tPSA会出现显著的交叉性重叠，会对前列腺癌患者的诊断带来一定的影响10，11。从中表明前列腺癌和前列腺良性疾病的鉴别仅仅依据tPSA是难以到达目标的，为此在诊断前列腺癌依靠tPSA是缺乏特异性的，不宜将其作为诊断前列腺癌的绝对
9、标准。为了使诊断率有所提高，也有研究者将前列腺特异性抗原速度（PSAV）和前列腺特异性抗原密度（PSAD）的相关概念提出，但是PSAD需要经过直肠B超对前列腺体积进行测量，PSAV要求在一段时间内对血清tPSA的浓度进行测定，因此这两种手段在诊断前列腺癌中均存在一定的限制性12，13。随着医疗技术的不断发展，近年来，发光免疫传感技术处于高速发展阶段，主要是依据抗体和抗原之间的高特异性而产生的结合与识别反应以此达到检测生物分子的功效，具有特异性强、灵敏度高、线性范围宽、设备简单、适用性强等特点，在分析测试领域中是作为当前最具有挑战性和竞争力的技术，已经得到了食品、环境、药物、生命科学等领域的认可
10、。当前的免疫传感技术的实验平台主要是依据微孔板的非均相分析模式，但是操作步骤较为复杂，常常包括分离、包埋、洗脱等，具有繁琐的分析过程，所需要分析的时间较长，并不能达到快速诊断和监测的要求。随着激光学发光均相免疫分析法的出现，从中免去了分离、洗脱等繁琐的步骤，有效的使性价比和分析效率得以极大的提高，在平常的应用中也越加明显，在取代通用的非均相免疫分析法中具有极大的潜质。相关研究显示，血清中存在较少的一部分还没有结合的fPSA，并且所占有的比例在前列腺增生和前列腺癌具有一定的差异性，由此在诊断前列腺癌中依据血清f/t PSA的比值进行了相应的研究，从中发现前列腺癌的诊断率的提高可以依据f/t PS
11、A的比值实施14，15。本次研究就FRET的均相免疫分析方法对前列腺癌的诊断进行了初探，研究结果表明，前列腺癌和前列腺增生患者的血清tPSA水平和健康人群有着明显的区别，然而tPSA值在410g/L时，BPH和PCa患者的血清tPSA没有明显的区别，然而f/t PSA比值在BPH和PCa患者中有着一定的差异，不但tPSA值在410g/L时有着差异，并且tPSA10g/L时，其前列腺癌患者同样具有一定的差异。从中得出前列腺癌患者的tPSA（24.1421.06）g/L明显高于前列腺增生患者，然而前列腺增生患者的fPSA（1.921.41）g/L明显低于前列腺癌患者，进一步证实了的f/t PSA比
12、值的差异性，为此可以将其作为前列腺癌诊断的实用指标。综上所述，采用FRET的均相免疫分析法对fPSA和tPSA指标进行检测，具有操作简单、灵敏度高的特点，并且能够准确、快速的提供有效的临床依据，在前列腺癌诊断中具有较高的诊断价值，值得广泛推广使用。参考文献1郝玉美，刘谦，宋娜玲. 前列腺癌干细胞相关肿瘤标志物的研究进展. 中国肿瘤临床，2013，40（19）：1199-1202.2曹达龙，叶定伟，张世林，等. 前列腺癌特异抗原3对前列腺癌LNCaP细胞增殖的影响. 中国癌症杂志，2012，22（2）：135-138.3褚靖，谢群，杨信，等. 不同PSA相关肿瘤标志物在前列腺癌中的诊断价值. 实
13、用医学杂志，2014，30（13）：2123-2125.4朱圣生，刘向云，孙祖越. 前列腺特异性抗原衍生体及前列腺癌高特异性生物标志研究现状. 中国药理学与毒理学杂志，2013，27（1）：114-118.5王道虎，郭悦江，陈炜，等. 前列腺体积和前列腺特异性抗原密度与前列腺癌检出率的关系. 中山大学学报（医学科学版），2013，34（5）：768-771.6王晓睿. 前列腺特异性抗原、前列腺特异性抗原密度在诊断老年前列腺癌患者中的临床价值. 中国老年学杂志，2013，33（4）：827-828.7文成勇，何如钢，胡昌俊. 前列腺特异性抗原体积密度在灰区前列腺癌中的鉴别诊断价值. 重庆医学，2
14、013，42（35）：4271-4273.8Roya Z， Shahabeddin S， Seyed JH. et al. Highly sensitive FRET-based fluorescence immunoassay for aflatoxin Bl using cadmium telluride quantum dots. Mikrochimica Acta： An International Journal for Physical and Chemical Methods of Analysis，2013，180（13/14）：1217-1223.9刘琛志，任伟. 患者年龄及
15、直肠超声特征联合血清PSA水平的logistic回归模型对前列腺癌的预测. 中国生化药物杂志，2014，34（7）：114-116，119.10卜劲松.前列腺癌患者血清OPG、BMP-7和PSA的变化及其临床意义. 中国卫生检验杂志，2013，23（1）：168-170.11郭枫，陈琳，李运柱，等. 前列腺特异抗原和碱性磷酸酶联合检测在早期诊断前列腺癌骨转移中的应用. 武汉大学学报（医学版），2012，33（3）：394-396.12K David Wegner， Stina Lindn， Zongwen Jin，et al. Nanobodies and 年anocrystals： high
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